| 发卡样CTGF特异性RNA干扰重组体的构建及筛选 |
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| 引用本文： | 主余华,张春清,任万华,马艳丽,赵幼安. 发卡样CTGF特异性RNA干扰重组体的构建及筛选[J]. 山东大学学报(医学版), 2006, 44(4): 351-356 |
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| 作者姓名： | 主余华 张春清 任万华 马艳丽 赵幼安 |
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| 作者单位： | 1. 山东大学山东省立医院消化内科,山东 济南 250021
2. 山东大学齐鲁医院消化内科,山东 济南 250012 |
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| 摘 要： | 目的：利用Pgenesil 1质粒载体构建介导结缔组织生长因子(CTGF)短发夹RNA表达的质粒，并筛选有效的抑制序列。方法:分别设计3对有小发夹结构的两条DNA序列及1对非特异对照序列，经退火成互补双链,再克隆至带有U6启动子的质粒载体Pgenesil 1中，构建重组体,转化DH5α菌株,提取质粒行酶切鉴定后,进行测序分析。将构建成功的4组重组体转染HSC T6 24?h后，通过半定量RT PCR分析HSC T6 CTGFmRNA的表达水平，与空白对照及仅加转染试剂组比较分析。结果:CTGF的shRNA片段被成功克隆到Pgenesil 1质粒载体中，经酶切与测序证实构建成功，转染HSC T6 24?h后，与空白对照组相比，通过半定量RT PCR分析发现有两组细胞CTGFmRNA水平明显下降，24?h抑制效率分别为(74±5)%,(P<0.01);(61±3)%,(P<0.05)。转染非特异shRNA组及仅加转染试剂组CTGFmRNA表达水平无明显变化。结论:成功构建了能表达CTGFshRNA的3组重组体，并筛选出能高效抑制CTGF表达的shRNA序列，为进一步探索肝纤维化基因治疗的新途径奠定了实验基础。
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| 关 键 词： | 结缔组织生长因子 RNA干扰 短发夹RNA 质粒 肝纤维化 基因表达 |
| 文章编号： | 1671-7554（2006）04-0351-06 |
| 收稿时间： | 2005-05-12 |
| 修稿时间： | 2005-05-12 |
Cloning and screening of the recombinant plasmids |
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| ZHU Yu-hua,ZHANG Chun-qing,REN Wan-hua,MA Yan-li,ZHAO You-an. Cloning and screening of the recombinant plasmids[J]. Journal of Shandong University:Health Sciences, 2006, 44(4): 351-356 |
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| Authors: | ZHU Yu-hua ZHANG Chun-qing REN Wan-hua MA Yan-li ZHAO You-an |
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| Affiliation: | 1.Department of Digestion, Shandong Provincial Hospital, Shandong University, Jinan 250021, Shandong, China； 2. Department of Digestion, Qilu Hospital of Shandong University, Jinan 250012, Shandong, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Connective tissue growth factor RNA interference Short hairpin RNA Plasmids Liver fibrosis Gene expression |
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