肝豆汤联合青霉胺对Wilson病模型肝脏铜死亡抑制作用

目的 观察肝豆汤联合青霉胺对Wilson病（WD）模型肝脏铜死亡的抑制作用。方法 以淡化致死基因（DL）小鼠为正常组，将毒牛奶（TX）小鼠随机分为模型组、肝豆汤组、青霉胺组和肝豆汤联合青霉胺组，每组8只。正常组及模型组予以0.9%氯化钠溶液0.2 mL/（10 g·d），肝豆汤组、青霉胺组和肝豆汤联合青霉胺组分别予以肝豆汤浓缩液0.2 mL/（10 g·d），青霉胺0.1 g/（kg·d），肝豆汤浓缩液 0.2 mL/（10 g·d）联合青霉胺0.1 g/（kg·d），连续灌胃30天。采用生化法、电感耦合等离子体-质谱法（ICP-MS）、HE染色、透射电镜、实时荧光定量PCR、Western Blot法和免疫组织化学法检测各组小鼠血清学指标和肝脏铜含量、病理改变、线粒体超微结构、铜死亡相关基因和蛋白以及硫辛酸（LA）的表达水平。结果 与正常组比较，模型组血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）水平，乳酸脱氢酶（LDH）、超氧化物歧化酶（SOD）活性和肝组织铜含量升高（P＜0.05），肝脏局部碎片状坏死，炎性细胞数升高（P＜0.01），线粒体损伤显著，铜死亡相关基因mRNA，铁硫簇蛋白、硫辛酰化蛋白、LA表达水平下降（P＜0.05），二氢硫辛酸转乙酰基酶（DLAT）二聚体和热休克蛋白70（HSP70）表达水平升高（P＜0.01）。与模型组比较，各治疗组血清ALT、AST水平，LDH、SOD活性及肝组织铜含量下降（P＜0.05），肝脏病理损伤减轻，炎性细胞数降低（P＜0.01），线粒体结构恢复，铜死亡相关基因mRNA、铁硫簇蛋白、lipDLAT、 lipDBT、 lipDLST、LA表达水平升高（P＜0.05），DLAT二聚体下降（P＜0.05）。与青霉胺组比较，肝豆汤联合青霉胺组 ALT、 AST 水平下降（P＜0.05），肝组织铜含量降低（P＜0.01），PDHB mRNA 表达、铁硫簇蛋白、硫辛酰化蛋白表达升高（P＜0.01，P＜0.05），DLAT二聚体、HSP70 表达下降（P＜0.01）。结论 肝豆汤联合青霉胺可促进铜排出并上调LA途径相关蛋白的表达，减轻WD模型肝脏铜死亡。肝豆汤对青霉胺治疗WD具有辅助增效作用。

Inhibitory Effect of Gandou Decoction Combined with Penicillamine on Liver Cuproptosis in Wilson Disease Model