| 表达荧光蛋白卡介苗菌株的构建与应用及其qPCR定量方法的建立北大核心CSCD |
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| 引用本文： | 崔佳,温炟,孙燚,杨国凤,吴长新.表达荧光蛋白卡介苗菌株的构建与应用及其qPCR定量方法的建立北大核心CSCD[J].中国病原生物学杂志,2021(9):997-1000. |
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| 作者姓名： | 崔佳 温炟 孙燚 杨国凤 吴长新 |
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| 作者单位： | 1.山西大学生物医学研究院化学生物学与分子工程教育部重点实验室030006;2.长治医学院微生物学教研室046000; |
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| 基金项目： | 国家科学技术部重大研发项目；“禽畜重要胞内菌基因调控及其与宿主互作的分子机制研究”项目(No.2017YFD0500303)；长治医学院春晖计划项目(No.QDZ201906)。 |
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| 摘 要： | 目的构建稳定表达红、绿色荧光蛋白的卡介苗(Bacille Calmette-Guérin,BCG)菌株,并建立快速定量BCG细菌数的qPCR方法。方法电转化构建稳定表达红、绿色荧光蛋白的BCG菌株,比较其与野生菌株的生长曲线。将此荧光蛋白标记的BCG感染人源单核巨噬细胞系THP1细胞,用共聚焦显微镜观察感染吞噬效果。基于BCG 16SrRNA序列设计特异性引物,应用qPCR定量检测BCG细菌基因组DNA,根据细菌平板计数菌落数与qPCR循环数绘制标准曲线,建立qPCR定量BCG细菌数的方法。结果构建的荧光蛋白标记BCG菌株荧光信号强,生长曲线与野生菌株基本一致,共聚焦显微镜观察细菌感染细胞后呈现良好荧光效果。建立的qPCR检测方法能定量检测BCG细菌数量,重复试验中组内和组间的变异系数均小于3%。结论构建的卡介苗菌株稳定表达荧光蛋白。建立的qPCR方法重复性好,可用于对BCG菌株的快速计数。
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| 关 键 词： | 卡介苗 荧光蛋白 qPCR 定量细菌数 |
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