| 摘 要： | 目的分子克隆新疆株细粒棘球绦虫缝隙连接通道蛋白(也称内联蛋白,EgInnexin unc9,EgInx)的完整开放阅读框(ORF)并鉴定,利用生物信息学软件分析该蛋白的分子特性,为进一步研究EgInx的功能和研制犬抗细粒棘球绦虫疫苗奠定基础。方法从新疆株细粒棘球蚴中扩增EgInx-ORF全长,克隆到pMD20-T上并测序;利用Expasy ProtParam、ProtScale、SignalP-5.0、TMHMM2.0、NetPhos3.1、ProtCompv9.0、NetSurfP-2.0和SOPMA、SWISS-MODEL等生物信息学分析软件分析EgInx的理化特性、信号肽序列、跨膜结构域、磷酸化位点、蛋白翻译后修饰位点及亚细胞定位、二级结构及三级结构;采用BLAST进行蛋白序列的同源性分析,采用Mega7进行系统进化分析。结果EgInx-ORF全长约1317 bp,编码438个氨基酸残基的EgInx蛋白;该蛋白等电点7.19,不稳定系数48.05,为不稳定蛋白;亲水性平均系数0.086,为疏水性蛋白,存在4个跨膜结构域;该蛋白不含信号肽序列,可能是非分泌跨膜蛋白。EgInx具有42个丝氨酸(Ser)磷酸化位点,29个苏氨酸(Thr)磷酸化位点,10个酪氨酸(Tyr)磷酸化位点;该蛋白有多个翻译后修饰位点,主要定位于细胞膜、高尔基体和线粒体。预测其二级结构以α-螺旋为主,占53.42%;三维结构以八聚体形式组装。EgInx与扁形动物门绦虫纲的多房棘球绦虫(Em)、小口膜壳绦虫(Hm),涡虫纲的东亚三角头涡虫(Dj),吸虫纲的中华枝睾吸虫(Cs)、日本血吸虫(Sj)的Innexin unc 9的氨基酸序列一致性分别为98.14%、58.97%、33.66%、33.11%、33.69%。进化树分析显示,EgInx与Em、Hm的Inx在一个分支上。结论成功克隆了EgInx-ORF,预测EgInx蛋白为疏水性跨膜蛋白,且含有多个磷酸化位点,可为EgInx的功能研究提供参考。
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