摘 要: | 目的:采用抑制性消减杂交技术(suppression subtractire hybridization,SSH)构建汉族人糖尿病肾病(dialbetic nephropth1y,DN)肾阳虚证DNA消减文库。方法:选择汉族人DN且中医辨证为肾阳虚证的患者以及正常人作为其对照组,进行正向和反向消减杂交。用硅胶法抽提血白细胞DNA,用RsaI酶切基因组DNA成大小不等的片段,分别与两种不同的接头连接,进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,将PCR产物与U载体连接,经蓝白斑筛选后,再用PCR方法插入片段筛选出阳性重组质粒,构建DN肾阳虚证DNA消减文库。结果:用SSH方法筛选出了DN肾阳虚证的差异DNA片段,得到600个白色克隆,再经PCR方法快速筛选出阳性重组质粒,从而成功地构建了DN肾阳虚证的DNA消减文库。结论:SSH技术能够快速有效地分离差异DNA片段以构建。DN肾阳虚证DNA消减文库,为进一步筛选和克隆DN肾阳虚证相关基因奠定了基础。
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