糖尿病肾病肾阳虚证DNA消减文库的构建

目的：采用抑制性消减杂交技术(suppression subtractire hybridization，SSH)构建汉族人糖尿病肾病(dialbetic nephropth1y，DN)肾阳虚证DNA消减文库。方法：选择汉族人DN且中医辨证为肾阳虚证的患者以及正常人作为其对照组，进行正向和反向消减杂交。用硅胶法抽提血白细胞DNA，用RsaI酶切基因组DNA成大小不等的片段，分别与两种不同的接头连接，进行两次消减杂交及两次抑制性PCR，将PCR产物与U载体连接，经蓝白斑筛选后，再用PCR方法插入片段筛选出阳性重组质粒，构建DN肾阳虚证DNA消减文库。结果：用SSH方法筛选出了DN肾阳虚证的差异DNA片段，得到600个白色克隆，再经PCR方法快速筛选出阳性重组质粒，从而成功地构建了DN肾阳虚证的DNA消减文库。结论：SSH技术能够快速有效地分离差异DNA片段以构建。DN肾阳虚证DNA消减文库，为进一步筛选和克隆DN肾阳虚证相关基因奠定了基础。