布鲁杆菌环介导等温扩增快速检测方法的建立

目的 建立一种环介导等温扩增(LAMP)快速检测动物布鲁杆菌的方法.方法 使用Primer 4.0,针对布鲁杆菌外膜蛋白(OMP31)基因保守区设计4条特异引物,在Bst大片段聚合酶的作用下,实现DNA的梯状等温扩增,并在此方法最适扩增条件优化的基础上,对其特异性、灵敏度进行实验,同时与普通PCR灵敏度进行比较,以及进行LAMP可视化实验.结果 本研究建立的检测方法对牛种布鲁杆菌(Brucella abortus,B.abortus)544A和104M、羊种布鲁杆菌(Brucella melitensis,B.melitensis)Rev-1和16M、猪种布鲁杆菌(Brucella suis,B.suis)S2和1330S、犬种布鲁杆菌(Brucellac anis,B.canis)RM6/66、绵羊附睾种布鲁杆菌(Brucela ovis,B.ovis)63/290、沙林鼠种布鲁杆菌(Brucella neotomae,B.neotomae)5K33检测阳性,而耶尔森氏菌(Yersinia enterocolitica,Y.enterocolitica)O∶9、大肠杆菌(Escherichia coli E.coli)O157∶H7和沙门氏菌(Salmonella typhimurium,S.typhimunum)47729检测阴性.LAMP法检出最低DNA浓度为8.5×10-8 mg/L,较普通PCR检测灵敏度高.检测结果既可以通过电泳判定也可以通过可视化判定.结论 本研究所建立的布鲁杆菌LAMP检测方法具有特异、灵敏、设备要求简单等特点,适用于基层兽医部门进行布鲁杆菌的快速检测.

Detection of Brucella by loop-mediated isothermal amplification