羊种布鲁杆菌诱导小鼠巨噬细胞的凋亡及caspase 3、8、9对细胞凋亡的调控

目的 观察羊种布鲁杆菌强毒株16M和减毒株M5-90诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7凋亡的差异性,以及半胱氨酸蛋白酶(caspase)3、8、9对细胞凋亡的调控作用.方法 通过羊种布鲁杆菌16M、M5-90对小鼠巨噬细胞多重感染(细菌数:细胞数=100∶1、10∶1、50∶1)的方式,找出最佳感染复数(MOI).按最佳MOI=50∶1建立布鲁杆菌16M、M5-90感染巨噬细胞的模型,分别在感染后2、4、8、12、24、48 h后收集被感染的细胞,计数细胞内细菌菌落形成数量单位,流式细胞仪检测细胞凋亡率及caspase 3、8、9对细胞凋亡的影响.结果 在感染后2、4、8、12、24、48 h,16M在细胞内细菌菌落形成数量分别为105.4、104.8、105.8、106.5、108.0、109.0,M5-90在细胞内细菌菌落形成数量分别为106.1、106.2、106.4、106.3、106.1、105.0,其中在感染后24、48 h,强毒株16M较弱毒株M5-90在细胞内寄生菌菌落形成数量明显增加.在感染后2、4、8、12、24、48 h,16M诱导的巨噬细胞凋亡率分别为(2.67±0.09)％、(13.13±0.3)％、(6.56±0.42)％、(6.49±0.28)％、(16.07±0.86)％、(24.23±1.67)％,M5-90诱导的巨噬细胞凋亡率分别为(3.62±0.02)％、(32.01±2.59)％、(17.58±0.44)％、(16.09±0.10)％、(62.53±2.70)％、(8553±0.15)％.对照组巨噬细胞凋亡率分别为(1.90±0.20)％、(1.92±0.16)％、(1.99±0.03)％、(2.48±0.11)％、(3.56±0.07)％、(5.26±0.33)％],各组同时间两两比较差距均有统计学意义(P均＜ 0.01).其中在感染后24～48h,弱毒株M5-90比强毒株16M更能促进巨噬细胞的凋亡.在感染后24 h,对照组caspase 3、8、9的表达量分别为(1.47±0.05)％、(1.52±0.02)％、(2.47±0.12)％,M5-90组caspase 3、8、9的表达量分别为(9.70±0.46)％、(6.08±0.56)％、(35.08±1.64)％,caspase 3、8、9的表达量与对照组相比明显增高(P均＜ 0.01).在加入caspase 3、8、9抑制剂后24 h,对照组细胞凋亡率为(66.72±1.28)％,M5-90组caspase 3、8、9的细胞凋亡率分别为(22.62±0.55)％、(53.15±1.85)％、(29.18±0.23)％,caspase 3、9的细胞凋亡率与对照组相比明显降低(P均＜ 0.01).结论 布鲁杆菌强毒株16M和减毒株M5-90均能加速巨噬细胞凋亡,M5-90作用大于16M.在M5-90作用下,caspase 3、8、9对巨噬细胞凋亡均有调控作用.

Analysis of macrophage apoptosis induced by Brucella melitensis and the effects of caspases 3, 8 and 9