SV40T基因转染黑素细胞遗传稳定性研究

目的 探讨SV40T抗原基因转染构建的永生化黑素细胞的遗传稳定性。方法 体外培养黑素细胞，对第20代的永生化黑素细胞进行四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法分析细胞增殖情况，同时分析染色体核型，流式细胞仪分析细胞周期和DNA倍体；逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）半定量分析第20代细胞hMLHl、hMSH2错配修复基因表达，并提取细胞基因组，微卫星位点PCR产物进行变性聚丙烯酰胺电泳分析微卫星不稳定性。结果 经过连续培养的第20代转染的黑素细胞左旋多巴染色阳性，增殖速度较原代培养黑素细胞明显增快，细胞周期S＋G2期细胞比例较原代黑素细胞增多，同时未见异常DNA倍体，染色体仍为2倍体，转染细胞的hMLHl、hMSH2错配修复基因表达较正常黑素细胞上调；在1p22（D1S187）、5q14（D5S107）、18q12．2—12．3（D18S34）3个位点未出现微卫星不稳定性（microsatellite instabilitv，MI）。结论SV40T抗原基因转染的黑素细胞体外培养不出现遗传稳定性的异常改变。

Genetic stability of immortal melanocytes transfected by SV40T antigen gene