| 乙型肝炎病毒e抗原基因作为酵母双杂交体系结合域载体的构建及表达 |
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| 引用本文： | 李伯安,戚扬,舒翠利,刘岩,陈昊,李靖,高蓉,侯俊,程云.乙型肝炎病毒e抗原基因作为酵母双杂交体系结合域载体的构建及表达[J].中华实验和临床病毒学杂志,2004,18(2):158-161. |
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| 作者姓名： | 李伯安 戚扬 舒翠利 刘岩 陈昊 李靖 高蓉 侯俊 程云 |
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| 作者单位： | 100039,北京,解放军第三○二医院传染病研究所免疫研究室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助 (3 0 10 0 170 ) |
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| 摘 要： | 目的 以乙型肝炎病毒e抗原 (HBeAg)全基因为外源片段 ,构建酵母双杂交体系中结合域载体 ,研究其在酵母细胞中的表达 ,排除自身激活作用及毒性作用 ,验证其适用性。方法 根据报道序列设计、合成HBeAg全基因巢式引物 ,取患者血清 ,通过PCR方法分离HBeAg全基因片段 ,克隆入T载体 ,酶切鉴定及序列测定后 ,克隆入酵母双杂交体系结合域载体pGBKT7,构建pGBKT7 eAg载体。再次酶切鉴定阳性克隆后转入酵母 ,验证毒性作用 ;通过Western blot实验证实外源基因在酵母中的表达 ;并进一步验证自身激活作用。结果 由血清中分离的及 2次酶切鉴定的片段大小分别为 6 5 7bp和 6 39bp ,与预期大小一致 ;序列测定与报道的HBV分离株核酸及氨基酸同源性分别为96 %和 10 0 % ;转人酵母后无毒性及自身激活作用 ;Western blot实验出现阳性与预期大小 (2 4 .3× 10 3)一致的条带。结论 pGBKT7 eAg载体在酵母细胞中表达出融合蛋白 ,进一步验证无自身激活及毒性作用 ,此载体构建成功 ,适用于酵母双杂交体系。
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| 关 键 词： | 乙型肝炎病毒e抗原 基因表达 酵母双杂交体系 结合域载体 |
| 修稿时间： | 2003年7月8日 |
Construction and expression of DNA-binding domain plasmid with hepatitis B virus e antigen in yeast double hybrid system |
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| LI Bo-an,QI Yang,SHU Cui-li,LIU Yan,CHENG Hao,LI Jing,GAO Rong,HOU Jun,CHENG Yun. Derpartment of Immunology,The No. Hospital of PLA,BeiJing ,fChina.Construction and expression of DNA-binding domain plasmid with hepatitis B virus e antigen in yeast double hybrid system[J].Chinese Journal of Experimental and Clinical Virology,2004,18(2):158-161. |
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| Authors: | LI Bo-an QI Yang SHU Cui-li LIU Yan CHENG Hao LI Jing GAO Rong HOU Jun CHENG Yun Derpartment of Immunology The No Hospital of PLA BeiJing fChina |
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| Institution: | Department of Immunology, The No. 302 Hospital of PLA, Beijing 100039, China. |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Hepatitis B virus Hepatitis B e antigen Yeasts |
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