应用辣根过氧化物酶化学发光检测毒素原性大肠杆菌方法的建立

利用活化酶标复合物（HRP－PBQ－PEI^ －NH3^ ）直接标记毒素原性大肠杆菌不耐热肠毒素（ETEC－LT）基因片段（0.8kb)作探讨。HRP在戊二醛作用下与单链靶DNA形成DNA和酶的共价复合物，与DNA探针结合的辣根过氧化物酶（HRP）催化相应的发光剂，经增强型化学发光反应（ECL）在普通X胶片上自显影（CPD）检测ETEC－LT。结果可检测到0.03pg的纯质粒DNA和10^3的ETEC菌细胞，dot blot杂交证明该酶标基因探针仅与产生LT肠毒素的ETEC杂交，其余均未见杂交阳性反应，结果表明酶（HRP）标基因探针化学发光法检测ETEC是一种简便，快速，安全，高度敏感和特异的非放射性标记基因探针检测技术。