肠出血型大肠埃希菌O104:H4转运蛋白AatA单克隆抗体制备及鉴定

目的 表达肠出血型大肠埃希菌O104 :H4的融合蛋白GST-AatA，获得单克隆抗体。方法 人工合成肠出血型大肠埃希菌O104 :H4的转运蛋白基因aatA，连接至pMDl8-T载体，转化E.coli DH5α，双酶切回收，构建原核表达质粒PGEX-6P-1-GST-AatA，测序鉴定后，转化E.Coli BL21，IPTG诱导表达，SDS-PAGE和Western Blot分析目的蛋白的表达并纯化该重组蛋白。将纯化后的融合蛋白GST-AatA免疫Balb/c小鼠，制备相应单克隆抗体；并对该单克隆抗体的纯度、亚型、效价、特异性进行鉴定和分析。结果 构建的原核表达载体PGEX-6P-1-GST-AatA能表达融合蛋白GST-AatA；亲和层析纯化后融合蛋白GST-AatA纯度达到95 %，免疫小鼠后得到相应特异性单克隆抗体。结论 成功制备出一株抗转运蛋白AatA的单克隆抗体，该抗体为IgG1亚型，特异性好，效价高，纯度可达97%。