| 人护骨素-谷胱甘肽转硫酶融合蛋白基因的构建与表达 |
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| 引用本文： | 刘继中,纪宗玲,胡蕴玉,陈苏民,陶惠人.人护骨素-谷胱甘肽转硫酶融合蛋白基因的构建与表达[J].中华内分泌代谢杂志,2003,19(4):321-323. |
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| 作者姓名： | 刘继中 纪宗玲 胡蕴玉 陈苏民 陶惠人 |
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| 作者单位： | 1. 710032,西安,第四军医大学附属西京医院骨科
2. 第四军医大学生物化学和分子生物学教研室 |
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| 摘 要： | 目的 克隆人护骨素(OPG)成熟肽段编码区基因并研究在大肠杆菌中OPG-谷胱甘肽转硫酶(GST)的融合蛋白的表达。方法 采用RT-PCR从人骨肉瘤细胞系MG63的总RNA中扩增OPG成熟肽段编码区cDNA，构建原核表达载体pGEX-4T-1，转化大肠杆菌后经0．1mmoL／L异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后收集菌体蛋白，以SDS—PAGE电泳及Western印迹鉴定蛋白表达，应用谷胱甘肽-Sepharose4B柱亲和层析纯化目的蛋白。结果 获得人OPG成熟肽段编码区cDNA，转化菌株可表达人OPG-GST融合蛋白，蛋白表达量约为菌体总蛋白的15．5％。Western印迹表明在相对分子质量66000处融合蛋白能与人OPG多克隆抗体特异性结合。经亲和层析后获得纯度为95．7％的OPG—GST融合蛋白。结论 获得人OPG成熟肽段全长cDNA，在大肠杆菌中表达OPG—GST融合蛋白并以亲和层析法进行纯化。
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| 关 键 词： | 护骨素 谷胱甘肽转硫酶 融合蛋白 基因 构建 表达 骨质疏松 |
| 修稿时间： | 2001年11月2日 |
Construction and expression of human osteoprotegerin-glutathione transsulfurase fusion protein gene |
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| Keywords: | Osteoprotegenin Cloning molecular Gene expression |
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