H9亚型禽流感病毒RT-LAMP可视化检测方法的建立

目的根据环介导等温扩增技术（LAMP）,建立了一种适用于H9亚型禽流感病毒（AIV）的逆转录环介导等温扩增（RT-LAMP）快速检测方法。方法根据GenBank中的H9亚型AIV血凝素（HA）基因序列,在保守区设计了一套针对HA基因8个区域的6条特异性引物,并对反应条件进行优化。结果结果表明该方法对H3、H5、H7亚型AIV及其它禽呼吸道病原体均无扩增反应,并可通过反应液是否有沉淀或向反应液中加入荧光染料来对结果进行可视化观察;扩增反应只需要在常规水浴锅中进行,50min之内可完成反应;该方法对H9亚型AIV RNA的最小检测限为0.01pg,灵敏度是一步法RT-PCR方法的1 000倍。结论本研究建立的RT-LAMP方法简便、快速、灵敏、特异,适合在基层进行H9亚型AIV的快速检测。