| 人PRMT1真核表达载体的构建及鉴定 |
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| 引用本文： | Li CY,Sun QZ,Yang XD,Zhong B,Han Y,Lv SM. 人PRMT1真核表达载体的构建及鉴定[J]. 细胞与分子免疫学杂志, 2012, 28(4): 384-387 |
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| 作者姓名： | Li CY Sun QZ Yang XD Zhong B Han Y Lv SM |
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| 作者单位： | 西安交通大学医学院遗传与分子生物学系;西安市卫生学校生物化学教研组 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(81070030,81170017);西安交通大学2011年度基本科研业务费(xjj2011021) |
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| 摘 要： | 目的:构建人PRMT1基因真核表达载体,并进行表达检测及鉴定。方法:采用RT-PCR技术扩增人PRMT1全长cDNA;经过双酶切、连接等反应,构建pcDNA3.1(+)-PRMT1真核表达载体,并转化DH5α感受态细胞;用含氨苄青霉素的LB培养基筛选阳性克隆;经菌液PCR及测序鉴定重组质粒;瞬时转染A549细胞,采用实时定量PCR检测重组质粒的表达水平及PRMT1对eotaxin-1和ccr-3表达的影响。通过Western blot从蛋白水平检测重组质粒在真核细胞内的表达。结果:RT-PCR扩增的人PRMT1全长cDNA为1136 bp;所筛选出的pcDNA3.1(+)-PRMT1重组载体中插入片段与NCBI GenBank文库中人PRMT1 cDNA的序列完全一致;实时定量PCR和Western blot检测证实重组质粒在A549细胞内可高效表达;并且PRMT1与eotaxin-1和ccr-3的表达呈正相关性。结论:成功构建了pcDNA3.1(+)-PRMT1重组载体,为进一步研究PRMT1基因的作用机制奠定基础。
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| 关 键 词： | PRMT1 真核表达载体 基因克隆 A549细胞 |
Construction and identification of human PRMT1 gene eukaryotic vector |
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| Li Chen-Yan,Sun Qing-Zhu,Yang Xu-Dong,Zhong Bo,Han Yan,Lv She-Min. Construction and identification of human PRMT1 gene eukaryotic vector[J]. Chinese journal of cellular and molecular immunology, 2012, 28(4): 384-387 |
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| Authors: | Li Chen-Yan Sun Qing-Zhu Yang Xu-Dong Zhong Bo Han Yan Lv She-Min |
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| Affiliation: | Department of Medical Genetics and Molecular Biology, Xi'an Jiaotong University College of Medicine, Xi'an 710061, China. |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | PRMT1 eukaryotic expression vector gene cloning A549 cell line |
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