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| 高迁移率族蛋白B1的表达纯化及其对单核细胞释放炎症因子的影响 | |
| 引用本文： | 丁宁,肖慧,高巨,许立新,佘守章. 高迁移率族蛋白B1的表达纯化及其对单核细胞释放炎症因子的影响[J]. 中国急救医学, 2009, 29(8). DOI: 10.3969/j.issn.1002-1949.2009.08.013 |
| 作者姓名： | 丁宁 肖慧 高巨 许立新 佘守章 |
| 作者单位： | 1. 广州市第一人民医院麻醉科,510180 2. 广州市第一人民医院门诊部,510180 3. 广州中医药大学第二附属医院(广东省中医院)麻醉科,510120 |
| 基金项目： | 广州市医药卫生科技一般引导项目，重点项目，广东省医学科研基金项目 |
| 摘 要： | 目的 通过重组HMGB1蛋白,观察其对单核细胞株THP-1释放炎症因子的影响.方法 用RT-PCR方法扩增人HMGB1 cDNA,将目的 片段HMGB1亚克隆到原核表达载体pGEX4T-1并转化大肠杆菌BL21,以IPTG诱导HMGB1融合蛋白表达,经Ni2+-NTA和多黏菌素B亲和层析柱纯化蛋白.分别用不同浓度的重组HMGB1蛋白(10、50和100 ng/mL)刺激THP-1细胞24 h,应用Liquichip液相蛋白芯片系统检测培养上清中TNF-α、IL-1、IL-6和IL-8的浓度;以终浓度为100 ng/mL的HMGB1蛋白分别刺激THP-1细胞1、3、6、12和24 h,检测上述细胞因子的浓度.结果成功表达、纯化了重组HMGB1蛋白,与对照组相比,浓度为10、50和100 ng/mL的HMGB1蛋白均使TNF-α、IL-1、IL-6和IL-8的分泌增加(P均<0.05),并且随着HMGB1蛋白剂量的增加呈递增趋势;上述细胞因子水平在以100 ng/mL的HMGB1刺激后3 h或6 h即开始升高(P均<0.05),并且均随刺激时间的延长而呈递增趋势.结论 HMGB1可诱导一系列细胞因子的产生和释放,为临床防治脓毒症提供了一个新的靶点. |
| 关 键 词： | 高迁移率族蛋白B1 单核细胞 脓毒症 炎症因子 |
Expression and purification of high mobility group box 1 protein and its effect on the secretion of inflammatory cytokines in THP-1 cells |
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