8-氯腺苷通过磷酸化修饰提高转录因子CREB的活性

背景与目的：8－氯腺苷是国内新近研发的抗肿瘤药物,其分子作用机制尚未完全阐明。本实验研究该药对HL－60细胞转录因子cAMP应答元件结合蛋白（cAMP-response-element-binding protein,CREB)活性的影响及其相关机制。方法：应用MTT法检测8－氯腺苷对人早幼粒细胞白血病细胞株HL－60的半数抑制浓度（IC50）,用蛋白印迹实验（Western blot analysis)检测药物作用不 时间CREB蛋白水平和CREB磷酸化水平,用凝胶阻滞实验（Cel shift assay)检测药物作用不同时间CREB与DNA的结合水平。结果：（1） 8－氯腺苷对HL－60细胞的IC50约为0．42umol/L.(2)8-氯腺苷快速诱导CREB磷酸化,30min达到最高水平,6h恢复至基础水平,CREB蛋白水平在药物作用期间保持恒定。（3）8－氯腺苷不改变CREB与DNA结合能力,结论：8－氯腺苷诱导CREB转录因子活性的提高依赖于CREB磷酸化水平的提高,而与CREB蛋白水平及CREB与DNA的结合水平无关。

8-Chloro-adenosine increases the activity of transcription factor CREB by modification of phosphorylation