| 在原核细胞中重组人肝刺激因子的表达、纯化及其功能研究 |
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| 引用本文： | 阳志成,吕瑾,安威. 在原核细胞中重组人肝刺激因子的表达、纯化及其功能研究[J]. 南华大学学报(医学版), 2006, 34(1): 10-14 |
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| 作者姓名： | 阳志成 吕瑾 安威 |
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| 作者单位： | 1. 首都医科大学,细胞生物学系,北京,100069;南华大学,生物化学与分子生物学教研室
2. 首都医科大学,细胞生物学系,北京,100069 |
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| 摘 要： | 目的肝刺激因子（hepatic stimulator substance, HSS）在肝细胞中含量甚微、纯化困难,至今未分离到理想的生化纯品.利用DNA重组技术,进行人肝刺激因子（human HSS, hHSS）基因原核表达研究.方法 hHSS基因片段经PstⅠ和NdeⅠ消化后,定向插入至pT7-7载体相应位点.转化感受态细菌DH5α,通过限制性酶切图谱分析及DNA测序反应鉴定hHSS基因.再将pT7-7-hHSS表达载体转化到BL21（DE3）中,以IPTG诱导hHSS表达,通过超滤膜及阴离子交换柱纯化,获得目的蛋白,经蛋白印迹杂交及蛋白质肽指纹图谱分析鉴定hHSS.重组hHSS作用于BEL-7402细胞,利用MTT法检测其促增殖作用.结果 pT7-7-hHSS正确地表达了hHSS,纯化的rhHSS具促增殖作用,并呈现剂量-效应关系.结论通过构建pT7-7-hHSS原核表达体系,能正确高效地表达hHSS,且具有生物学活性.
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| 关 键 词： | 原核表达载体 人肝刺激因子 诱导表达 MTT检测 生物活性 |
| 文章编号： | 1672-7444（2006）01-0010-05 |
| 收稿时间： | 2005-10-18 |
| 修稿时间： | 2005-10-18 |
Molecular Cloning, Expression, Purification, and Characterization of Human Hepatic Stimulatory Substance by Non-fusion Vector of E.coli |
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| YANG Zhi-cheng,LV Jin,AN Wei. Molecular Cloning, Expression, Purification, and Characterization of Human Hepatic Stimulatory Substance by Non-fusion Vector of E.coli[J]. Journal of Nanhua University(Medical Edition), 2006, 34(1): 10-14 |
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| Authors: | YANG Zhi-cheng LV Jin AN Wei |
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| Affiliation: | 1. Department of Cell Biology, Capital University of Medical Sciences, Beijng 100069, China ;2. Department of Biochemistry and Molecular Biology Research, Nanhua University, He ngyang, Hunan 421001, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | prokaryotic expression vector human hepatic stimulator substance expression MTT assay bio - activity |
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