干血斑样本用于人类免疫缺陷病毒1型前病毒基因诊断的研究

目的研究干血斑（DBS）样本用于人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）感染前病毒DNA基因诊断的可行性。方法采集59例静脉吸毒HIV-1感染者和22名HIV-1阴性健康人EDTA抗凝静脉全血5ml，保存全血1ml，另用50μl制备干血斑样本后，分离血浆。QIAamp Blood Mini试剂盒和10％Chelex 100树脂分别提取全血和干血斑中细胞DNA。Roche Cobas Amplicor逆转录聚合酶链反应检测HIV-1感染者血浆病毒载量。HIV-1Env基因Gp41区，gag基因，pol基因分别用2对外侧和内侧引物，按照套式PCR方法，进行扩增。以HIV-1任何两个基因区扩增结果组合判断HIV-1感染。结果在重复2～3次的前提下，59份DBS样本HIV-1感染基因诊断敏感度93％（95％可信区间89％～97％），34份全血样本94％（95％可信区间89％～98％）。疋。检验显示，两种样本用于HIV-1基因诊断时差异无统计学意义。22份两种阴性样本特异性均为100％（95％可信区间95．93％～100％）。8份血浆病毒载量（VL）〉4．0 Log的DBS样本用于基因诊断的可重复性和HIV-1感染样本检出率优于5份VL〈4．0 Log样本。18对全血和DBS样本HIV-1基因诊断一致性分析，符合率94％，一份DBS样本HIV-1特异三个基因片段均未扩增。结论干血斑样本易采集，便于运输，保存条件低，费用低廉，用于HIV-1基因诊断时与全血样本检测结果无显著性差异，病毒载量〈4．0 Log的样本，为增加检出概率需要对样本重复检测。DBS样本HIV-1基因诊断方法适合于无条件立即处理血样本的偏远地区或采样困难的感染者的诊断，及HIV-1母婴垂直传播研究中婴幼儿感染的早期诊断。

Feasibility of detection of HIV-1 proviral DNA on dried blood spot samples on filter paper