达格列净通过p38丝裂原活化蛋白激酶抑制高糖诱导的人肾小球足细胞损伤

目的 探讨达格列净通过p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）信号通路对D-葡萄糖诱导的人肾小球足细胞凋亡、自噬、炎症反应及氧化损伤的影响。方法 体外培养人肾小球足细胞（HGPCs），分为对照组（5 mmol/L D-葡萄糖）、D-葡萄糖组（30 mmol/L D-葡萄糖）、达格列净组（30 mmol/L D-葡萄糖＋50 μmol/L达格列净）、抑制剂组（30 mmol/L D-葡萄糖＋10 μmol/L p38 MAPK通路抑制剂SB 203580）、达格列净＋抑制剂组（30 mmol/L D-葡萄糖＋50 μmol/L达格列净＋10 μmol/L SB 203580）和达格列净＋激活剂组（30 mmol/L D-葡萄糖＋50 μmol/L达格列净＋10 μmol/L p38 MAPK通路激活剂C16-PAF）。对照组与D-葡萄糖组用D-葡萄糖干预24 h；其他组D-葡萄糖干预24 h后相应药物继续干预 24 h。采用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）检测细胞活力；采用Hoechst 33258染色法检测细胞凋亡率；采用ELISA检测白细胞介素（IL）-1β、IL-6、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、丙二醇（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）的表达水平；采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测酵母ATG6同源物（Beclin-1）、微管相关蛋白1轻链3 Ⅱ（LC3 Ⅱ）mRNA表达水平；采用Western印迹法检测Beclin-1、LC3 Ⅱ、p53、p38 MAPK及p-p38 MAPK蛋白表达。结果 与对照组相比，D-葡萄糖组细胞活力降低（P＜0.05），达格列净组细胞活力升高（P＜0.05），细胞凋亡率，IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA、Beclin-1、LC3 ⅡmRNA和蛋白、p53和p-p38 MAPK蛋白水平升高（P＜0.05），SOD水平降低（P＜0.05）。与D-葡萄糖组相比，达格列净组和抑制剂组细胞凋亡率、IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA、Beclin-1、LC3 ⅡmRNA和蛋白、p53和p-p38 MAPK蛋白水平降低（P＜0.05），SOD水平升高（P＜0.05）。与达格列净组相比，达格列净＋抑制剂组细胞凋亡率、IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA、Beclin-1、LC3 Ⅱ mRNA和蛋白、p53和p-p38 MAPK蛋白水平进一步降低（P＜0.05），SOD水平进一步升高（P＜0.05）；达格列净＋激活剂组与达格列净＋抑制剂组变化趋势相反，与达格列净组差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 达格列净可抑制高糖诱导的人HGPCs的凋亡、自噬、炎症反应及氧化损伤，其作用机制可能与抑制p38 MAPK通路信号转导相关。

Dapagliflozin inhibits human glomerular podocytes damage through p38 mitogen-activated protein kinase