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人类nm23-H1基因重组腺病毒的构建及鉴定
引用本文:孟薇,王一飞,胡红梅,熊盛,钱垂文,张美英. 人类nm23-H1基因重组腺病毒的构建及鉴定[J]. 国际肿瘤学杂志, 2006, 33(6): 466-469
作者姓名:孟薇  王一飞  胡红梅  熊盛  钱垂文  张美英
作者单位:510632,广州,暨南大学暨南生物医药研究开发基地;510632,广州,暨南大学暨南生物医药研究开发基地;510632,广州,暨南大学暨南生物医药研究开发基地;510632,广州,暨南大学暨南生物医药研究开发基地;510632,广州,暨南大学暨南生物医药研究开发基地;510632,广州,暨南大学暨南生物医药研究开发基地
基金项目:国家自然科学基金面上项目(30400071);科技部中澳科技合作特别基金资助项目(国科外字2004-43号);广东省科技计划基金资助项目(2005850301017)
摘    要:目的构建人肿瘤转移抑制基因nm23-H1的重组腺病毒载体.方法通过PCR方法以pcDNA3.1-nm23-H1为模板扩增出编码152个氨基酸的nm23-H1基因,并连接入穿梭质粒pShuttle-CMV.将含有目的基因的重组穿梭质粒pShuttleCMV-nm23-H1经Pme Ⅰ线性化后转化入AdEasier-1感受态细胞,用含硫酸卡那霉素的LB培养基筛选重组子,并用PCR及酶切方法鉴定.鉴定正确的pAd-nm23-H1质粒经Pac Ⅰ线性化后转染293细胞,包装重组腺病毒Adeno-nm23-H1,并进行PCR鉴定及病毒滴度测定.结果PCR、酶切鉴定及测序结果证实pShuttleCMV-nm23-H1及pAd-nm23-H1质粒正确构建,收获病毒后的PCR鉴定及DNA测序结果证明Adeno-nm23-H1包被成功且无野生型腺病毒产生.重组腺病毒Adeno-nm23-H1滴度为4.3×109/ml.结论成功构建了重组腺病毒载体Adeno-nm23-H1,为进一步研究nm23-H1抑制肿瘤转移分子机制及基因治疗奠定了基础.

关 键 词:基因  nm23-H1  腺病毒    肿瘤抑制
文章编号:1673-422X(2006)06-0466-04
收稿时间:2006-03-03
修稿时间:2006-03-23

Construction and identification of recombinant adenovirus nm23-H1
MENG Wei,WANG Yi-fei,HU Hong-mei,XIONG Sheng,QIAN Chui-wen,ZHANG Mei-ying. Construction and identification of recombinant adenovirus nm23-H1[J]. Journal of International Oncology, 2006, 33(6): 466-469
Authors:MENG Wei  WANG Yi-fei  HU Hong-mei  XIONG Sheng  QIAN Chui-wen  ZHANG Mei-ying
Abstract:
Keywords:Gene nm23-H1   Adenoviruses,human  Genes,tumor suppressor
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