| 摘 要： | 目的探讨大鼠脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)对紫外线照射造成的软骨细胞DNA损伤的修复作用。方法取3~4周龄SD大鼠(体质量100~120 g)腹股沟脂肪,利用Ⅰ型胶原酶消化法体外分离培养ADSCs并传代;取第3代细胞采用流式细胞仪检测其表面相关标记,行成骨及成脂诱导鉴定其多向分化潜能。另取SD大鼠关节软骨,利用酶消化法分离培养软骨细胞并传代,并行甲苯胺蓝染色鉴定。取第3代软骨细胞,采用40 J/m~2剂量紫外线照射;照射后细胞分别以正常培养基培养(照射组)、以含ADSCs培养上清的培养基培养(ADSCs上清组)或与ADSCs共培养(ADSCs组)24h。以不进行紫外线照射的正常第3代软骨细胞作为对照(对照组)。采用MTS法检测细胞增殖情况,免疫荧光染色、Western blot法检测软骨细胞DNA损伤标志蛋白磷酸化组蛋白2A变异体(phosphorylatedhistone family 2A variant,γH2AX)的表达情况。结果经流式细胞仪检测及成骨、成脂诱导鉴定,所培养细胞为ADSCs。对照组、照射组及ADSCs上清组吸光度(A)值分别为2.20±0.10、1.34±0.04、1.57±0.06,照射组及ADSCs上清组显著低于对照组,照射组显著低于ADSCs上清组,比较差异均有统计学意义(P0.05)。免疫荧光染色示,照射组、ADSCs上清组及ADSCs组γH2AX蛋白荧光强度明显高于对照组,但ADSCs上清组及ADSCs组γH2AX蛋白荧光强度明显弱于照射组,ADSCs组和ADSCs上清组则无明显区别。Western blot法检测示,照射组、ADSCs上清组及ADSCs组γH2AX蛋白相对表达量均明显高于对照组,但ADSCs上清组及ADSCs组显著低于照射组,差异均有统计学意义(P0.05);ADSCs组和ADSCs上清组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论大鼠ADSCs有助于恢复紫外线照射后的软骨细胞的增殖,降低DNA损伤标志蛋白γH2AX的表达,对紫外线照射所致软骨细胞损伤具有修复作用。
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