慢病毒介导长链非编码RNA LOC100132354过表达载体的构建及鉴定

目的探讨慢病毒介导LOC100132354过表达载体的构建及鉴定。方法化学合成LOC100132354全基因序列,与GV303载体进行连接反应获得重组质粒;进一步制备感受态细胞,并行转化实验,PCR鉴定进行转化子,对阳性转化子进行测序;构建好的LOC100132354过表达载体转染至293T细胞包装病毒,采用荧光显微镜观察荧光情况,用q PCR检测LOC100132354的表达情况。结果酶切结果与预期一致,阳性转化子克隆测序结果与LOC100132354的RNA序列完全一致,293T细胞转染后荧光表达结果较强,q PCR结果显示293T细胞转染过表达载体后LOC100132354表达水平为对照组的555 427.148倍,差异有统计学意义(P0.001)。结论成功构建了慢病毒介导LOC100132354过表达载体,为后续进一步研究提供了基础。