| 摘 要： | 目的探讨益生菌制剂对脓毒症小鼠生存情况的影响及作用机制。方法 60只雄性C57BL6小鼠随机分为三组,分别为假手术组(20只)、对照组(20只)和实验组(20只)。在饲养2 d后,实验组小鼠每天给予200μL的益生菌制剂,对照组和假手术组小鼠每天给予200μL等渗Na Cl溶液,连续灌胃4周。分别对实验组小鼠与对照组小鼠进行盲肠结扎穿孔术(CLP),而假手术组小鼠不予盲肠穿刺,其余步骤同CLP。每组10只用于观察小鼠活动状态及7 d存活情况;每组剩余10只,术后24 h取血液、结肠组织。采用酶联免疫吸附实验法检测各组小鼠血清中炎症因子白细胞介素22(IL-22)、IL-2及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达水平,苏木素-伊红(HE)染色法观察各组小鼠结肠组织形态,免疫组织化学法观察各组小鼠肠黏膜抗紧密连接相关蛋白(Occludin)表达。结果假手术组小鼠生长状态良好;对照组小鼠则蜷缩在笼角,浑身战栗;实验组小鼠较对照组活跃,活动较多,未见明显战栗。术后第7天,对照组无小鼠存活,实验组小鼠仍有3只存活,予安乐死,其7 d存活情况显著高于对照组小鼠(P=0.020);而假手术组小鼠10只均存活,予安乐死。对照组与假手术组比较,小鼠血清IL-22(103±23)ng/L vs.(27±9)ng/L,t=7.590,P0.001]、IL-2(328±27)ng/L vs.(77±21)ng/L,t=21.368,P0.001]及TNF-α(94±22)ng/L vs.(56±9)ng/L,t=4.734,P0.001]表达水平比较,差异均有统计学意义;实验组与假手术组小鼠血清IL-22(75±33)ng/L vs.(27±9)ng/L,t=3.755,P=0.001]、IL-2(217±30)ng/L vs.(77±21)ng/L,t=10.850,P0.001]及TNF-α(107±20)ng/L vs.(56±9)ng/L,t=5.956,P0.001]表达水平比较,差异亦均有统计学意义;与对照组相比,实验组小鼠血清IL-22(103±23)ng/L vs.(75±33)ng/L,t=2.185,P=0.042]及IL-2(328±27)ng/L vs.(217±30)ng/L,t=8.371,P0.001]表达水平差异均有统计学意义,而TNF-α(94±22)ng/L vs.(107±20)ng/L,t=1.363,P=0.188]表达水平比较,差异无统计学意义。假手术组小鼠的结肠黏膜上皮完整,腺体排列规则,少许或无炎症细胞浸润;对照组小鼠则出现结肠黏膜上皮腺体排列紊乱、变形、缺失,肠上皮细胞间紧密连接结构模糊,以及炎症细胞广泛浸润现象,有些伴有隐窝脓肿形成;而实验组小鼠结肠上皮基本完整,未有糜烂缺失,腺体排列基本正常,炎症细胞浸润程度也较对照组小鼠有所减轻。免疫组织化学法检测结果显示,假手术组小鼠结肠上皮细胞腺泡结构完整,Occludin蛋白表达较多;对照组小鼠结肠上皮细胞腺泡结构破坏、消失,炎症细胞浸润,Occludin蛋白表达较少;实验组小鼠结肠上皮细胞腺泡结构尚完整,腺泡间间隙增宽,Occludin蛋白表达较对照组有所增加。结论益生菌可通过抑制肠上皮细胞间紧密连接相关蛋白的减少,稳定肠道黏膜屏障结构,有效提高脓毒症小鼠的存活情况。
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