大鼠泪腺上皮细胞的原代培养和鉴定

目的 从大鼠泪腺组织分离泪腺上皮细胞并鉴定。方法 采用胶原酶Ⅰ、透明质酸酶和DNA酶混合消化法分离细胞，并对泪腺上皮细胞进行纯化和鉴定。采用胶原预包被培养瓶，并在培养基中添加霍乱毒素(cholera toxin, CT)维持上皮细胞形态。采用细胞免疫荧光染色方法对培养的泪腺细胞主要标志物进行鉴定，包括上皮细胞标志物细胞角蛋白(cytokeratin, CK)和E-钙黏蛋白(E-cadherin, E-Cad),间充质细胞标志蛋白波形蛋白(vimentin, Vim),肌上皮细胞标志蛋白α-SMA和S100蛋白。结果 原代培养的泪腺上皮细胞在3天内贴附到瓶底上，并增殖形成汇合的单层细胞。泪腺上皮细胞表现出鹅卵石形态，并混有少量梭形细胞。分离培养的细胞高表达CK和E-Cad,弱表达α-SMA和S100蛋白，基本不表达Vim。结论 本研究成功建立了大鼠泪腺上皮细胞的原代培养方法，为泪腺疾病尤其是干眼病和干燥综合征的研究提供了一种稳定经济的体外模型。