EA-IL-15溶瘤腺病毒的构建及其对胶质瘤细胞特异性及有效性研究

目的 构建插入EA-IL-15双基因的溶瘤腺病毒(oAD-EA-IL-15),探讨其在体外对胶质瘤细胞的杀伤效果和特异性。方法 PCR法将EA-IL-15双基因插入腺病毒穿梭载体pXC1,将穿梭质粒pXC1-EA-IL-15及辅助质粒pBHG loxΔE1,3 Cre质粒共转染HEK393细胞,获得溶瘤腺病毒oAD-EA-IL-15。通过CCK-8细胞毒性实验,测定细胞相对活性,绘制剂量反应曲线。结果 成功构建溶瘤腺病毒载体(oAD)及含EA-IL-15双基因的溶瘤腺病毒载体(oAD-EA-IL-15)；体外包装获得相应的溶瘤腺病毒oAD和oAD-EA-IL-15；oAD对小鼠胶质瘤细胞GL261有明显杀伤作用(P＜0.05),对小胶质细胞BV2(非肿瘤细胞)的杀伤作用明显低于对GL261(P＜0.05),说明oAD具有特异性；oAD-EA-IL-15和oAD分别感染GL261、BV2细胞,对于GL261,oAD-EA-IL-15的半抑制浓度(IC₅₀)值为0.58×10⁷±1.30×10⁵ PFU/ml较oAD的IC₅₀值1.13×10⁷±1.98×10⁵PFU/ml低,对肿瘤细胞的杀伤作用强于oAD(P＜0.01),对于BV2,oAD-EA-IL-15对其活性的影响低于oAD(P＜0.01),说明oAD-EA-IL-15病毒的特异性优于oAD病毒。结论 携带EA-IL-15双基因的溶瘤腺病毒在体外对胶质瘤细胞具有明显的杀伤作用和特异性,可为胶质瘤治疗提供更加特异有效的途径。