| 大鼠Pdcd4基因真核载体的构建与表达 |
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| 作者姓名： | 钟波 李静 吕社民 侯伟 刘海燕 金巧艳 魏伟 |
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| 作者单位： | 西安交通大学医学部第二附属医院小儿内科7100061,西安交通大学医学部第二附属医院小儿内科7100061,西安交通大学医学部基础医学院生物化学与分子生物学系 710004,西安交通大学医学部第二附属医院小儿内科7100061,西安交通大学医学部第二附属医院小儿内科7100061,西安交通大学医学部第二附属医院小儿内科7100061,西安交通大学医学部第二附属医院检验科 710004 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(81800017)；陕西省自然科学基础研究计划项目(2017JQ8045)；西安交通大学自由探索与创新项目(1191329843)；西安交通大学第二附属医院院基金资助项目 |
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| 摘 要： | 目的 构建大鼠程序性细胞死亡因子4(programmed cell death 4, Pdcd4)基因真核表达载体,为进一步研究该基因的功能提供条件。方法 提取E3大鼠肺组织总RNA,RT-PCR扩增大鼠Pdcd4基因全长cDNA；经过双酶切、连接等反应,构建pEGFP-C1-Pdcd4重组表达载体。将该载体转染大鼠巨噬细胞系NR8383细胞,通过RT-qPCR与Western blot法检测NR8383细胞Pdcd4基因的表达。结果 RT-PCR扩增的大鼠Pdcd4全长cDNA为1410bp；pEGFP-C1-Pdcd4重组真核表达载体中插入片段与NCBI GenBank文库中大鼠Pdcd4 cDNA的序列完全一致；倒置荧光显微镜下观察转染后NR8383细胞中绿色荧光蛋白的表达确定转染成功；RT-qPCR与Western blot法检测NR8383细胞中Pdcd4基因的表达水平明显上调。结论 成功构建pEGFP-C1-Pdcd4重组真核表达载体,为进一步研究Pdcd4基因的作用机制奠定基础。
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| 关 键 词： | 程序性细胞死亡因子4 基因重组 pEGFP-C1载体 支气管哮喘 |
| 收稿时间： | 2018-12-18 |
| 修稿时间： | 2019-01-28 |
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