hsa_circ_0006411慢病毒载体的构建及验证

目的 构建环状RNA hsa_circ_0006411慢病毒载体,作为研究其在肺癌细胞的功能学实验的基础。方法 以人细胞混合样本cDNA为模板扩增环状RNA circ_0006411,EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切连接到pLC5-ciR载体中,转化感受态细胞,并测序阳性菌落产物；将得到的pLC5- circ_0006411-GFP载体转染293T细胞,40h后观测GFP的表达,并收集细胞PCR扩增circ_0006411基因,以pLC5-ciR空载体和空白组做对照。结果 测序结果与hsa_circ_0006411序列一致,且环化接头位点也与circbase中的位点一致；pLC5- circ_0006411-GFP载体转染293T细胞组circ_0006411相对表达量明显增高于另外两组,且绿色荧光蛋白表达。结论 成功构建了环状hsa_circ_0006411载体,能稳定转染293T细胞,可用于后续细胞实验。