紫草素通过促进ROS的产生诱导人非小细胞性肺癌A549细胞凋亡的机制

目的 研究紫草素对人非小细胞性肺癌A549细胞的抗肿瘤作用，并探讨其可能的机制。方法 不同浓度紫草素处理A549细胞和人正常肺MRC-5细胞，四氮唑盐还原（MTT）法检测细胞的活性；流式细胞术结合PI-FITC双染色测定细胞凋亡；2''7''-二氯双乙酸盐（DCFH-DA）荧光探针测定活性氧（reactive oxygen species，ROS）；Western blot法测定caspase-8、caspase-9、caspase-3、Bcl-2和Bcl-xL蛋白表达。结果 紫草素对A549细胞的增殖有明显的抑制作用，且呈现出时间和剂量依赖性（P<0.05，P<0.01）；当剂量≤10μmol/L时，其对MRC-5细胞的增殖没有明显的影响（P>0.05）。不同浓度紫草素处理24h后，A549细胞的凋亡率（早期凋亡+晚期凋亡）显著增加（P<0.05或P<0.01），caspase-8、caspase-9和caspase-3蛋白被诱导活化，caspase抑制剂（Z-VAD-FMK）预处理则明显降低A549细胞的凋亡率（P<0.01），并抑制以上3种蛋白的活化。另外，紫草素处理可引起A549细胞ROS的产生，且呈现出一定的剂量依赖性。ROS抑制剂N-乙酰-L-半胱氨酸（NAC）和L-谷胱甘肽（GSH）预处理可使A549细胞的凋亡率下降（P<0.01）。同时，紫草素处理可明显下调抗凋亡因子Bcl-2和Bcl-xL的表达（P<0.01），NAC和GSH预处理亦能上调Bcl-2和Bcl-xL的表达（P<0.01）。结论 紫草素可明显抑制肺癌A549细胞的增殖，其作用机制与诱导A549细胞产生大量的ROS，抑制抗凋亡因子Bcl-2和Bcl-xL表达，进而激活caspase依赖的凋亡途径有关。

Mechanisms of Shikonin Inducing Apoptosis in Human Non-small Cell Lung Cancer A549 Cells by Promoting ROS Production