| 微量酶标夹心杂交法定量检测人iNOS-mRNA |
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| 引用本文： | 许艳芳,吕建新. 微量酶标夹心杂交法定量检测人iNOS-mRNA[J]. 中国病理生理杂志, 2004, 20(10): 1950-1952 |
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| 作者姓名： | 许艳芳 吕建新 |
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| 作者单位： | 温州医学院检验医学与公共卫生学院，细胞与分子医学研究所，浙江 温州 325027 |
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| 基金项目： | 浙江省自然科学基金资助项目 (No .3975 10 )，浙江省医药卫生优秀青年科技人才专项科研基金资助项目 |
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| 摘 要： | 目的：建立一种高灵敏度、高特异性、精确、简便的微孔板酶联夹心杂交技术，对人iNOS-mRNA进行定量检测。方法：设计两条特异探针，其中一条为捕获探针，5'端连接氨基，能与微孔板表面的NOS基团共价结合，“竖直”地包被在微孔中，另一个为检测探针，3'端带有生物素标记。用脂多糖（LPS）刺激人外周血单个核细胞24 h后，提取巨噬细胞总RNA，进行RT-PCR扩增，PCR产物热变性后加入到已包被捕获探针的微孔板内，并加入检测探针进行夹心杂交，最后加入亲和素-辣根过氧化物酶（AV-HRP）及底物，在450 nm波长检测杂交信号。结果：该方法检测iNOS-mRNA的灵敏度明显高于RT-PCR-琼脂糖凝胶电泳；特异性高，RT-PCR和酶联夹心杂交均无非特异阳性信号出现；精密度良好。结论：本方法操作简单、灵敏度高、特异性强、结果数据化，适合于iNOS-mRNA的定量检测。
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| 关 键 词： | 酶联夹心杂交 逆转录聚合酶链反应 一氧化氮合酶 |
| 文章编号： | 1000-4718(2004)10-1950-03 |
| 收稿时间： | 2003-03-19 |
| 修稿时间： | 2003-05-14 |
An enzyme-linked sandwich hybridization on microplate for quantification of human iNOS mRNA |
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