| 重组人瘦素融合蛋白在大肠杆菌中的低温自诱导表达、纯化和活性鉴定 |
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| 引用本文： | 曾沃坦,单永强,王晓霞,黄炜,陈小军,周骋. 重组人瘦素融合蛋白在大肠杆菌中的低温自诱导表达、纯化和活性鉴定[J]. 军事医学科学院院刊, 2008, 32(5) |
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| 作者姓名： | 曾沃坦 单永强 王晓霞 黄炜 陈小军 周骋 |
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| 作者单位： | 1. 中国科学院研究生院,北京,100049;国家人类基因组北方研究中心,北京,100176
2. 国家人类基因组北方研究中心,北京,100176 |
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| 摘 要： | 目的:建立低温自诱导表达重组人瘦素(leptin)融合蛋白的系统方法,经体外纯化获得大量具有生物活性的瘦素蛋白.方法:从cDNA文库中扩增瘦素编码区,克隆到pGEM-T easy载体,测序正确后亚克隆到A1.3表达载体,转入BL21(DE3),低温自诱导表达.用SDS-PAGE及Western印迹分析鉴定表达产物.对低温自诱导表达产物rMBP-10His-Leptin进行纯化和酶切,获得可与瘦素单抗发生特异性反应的瘦素蛋白.用Km小鼠减肥实验检验其生物学活性.结果:在22×103处有明显的新增蛋白带,含量超过总蛋白的40%,Western印迹证实为瘦素蛋白.Km小鼠减肥实验证实其具有生物学活性.结论:成功建立了低温诱导表达rMBP-10His-Leptin的系统方法,获得大量瘦素蛋白,经验证表达产物具有免疫活性和生物学活性,可供进一步基础及临床研究应用.
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| 关 键 词： | 瘦素 重组融合蛋白质类 大肠杆菌 低温 免疫活性 自诱导 表达 蛋白纯化 |
Low temperature autoinducing expression,purification and identification for biological activity of recombined human leptin fusion protein |
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| ZENG Wo-Tan,SHAN Yong-Qiang,WANG Xiao-Xia,HUANG Wei,CHEN Xiao-Jun,ZHOU Cheng. Low temperature autoinducing expression,purification and identification for biological activity of recombined human leptin fusion protein[J]. Bulletin of the Academy of Military Medical Sciences, 2008, 32(5) |
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| Authors: | ZENG Wo-Tan SHAN Yong-Qiang WANG Xiao-Xia HUANG Wei CHEN Xiao-Jun ZHOU Cheng |
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| Affiliation: | ZENG Wo-Tan1,2*,SHAN Yong-Qiang2,WANG Xiao-Xia2,HUANG Wei2,CHEN Xiao-Jun2,ZHOU Cheng2(1.Graduate University of the Chinese Academy of Sciences,Beijing 100049,China,2.Chinese National Human Genome Northern Center,Beijing 100176,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Leptin recombinant fusion proteins Escherichia coli low temperature immunocompetence autoinduction expression protein purification |
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