| 大鼠足细胞的原代培养及其Nephrin的特异表达 |
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| 引用本文： | 顾杰,张春江,贾林,杨晓萍.大鼠足细胞的原代培养及其Nephrin的特异表达[J].广东医学,2017,38(6). |
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| 作者姓名： | 顾杰 张春江 贾林 杨晓萍 |
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| 作者单位： | 1. 石河子大学医学院 新疆石河子832003;2. 石河子大学医学院第一附属医院肾内科 新疆石河子832008 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目 |
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| 摘 要： | 目的 建立简便的大鼠足细胞原代培养体系,检测其去氧肾上腺素(Nephrin) mRNA及蛋白的表达水平.方法 无菌取肾,分离肾皮质,胶原酶消化法分离肾小球,培养9～10d,胰蛋白酶差异消化法传代,过筛去除肾小球继续培养5～7 d:形态学观察和间接免疫荧光法进行足细胞鉴定;流式细胞仪分析足细胞纯度;实时定量PCR(qRT-PCR)、间接免疫荧光法和Western blot法比较前三代足细胞中Nephrin mRNA及蛋白的表达水平.结果 接种5d后大部分肾小球贴壁,肾小球周围有细胞爬出,其最外缘有树枝状细胞分布,形态学及特异性抗体Nephrin、WT-1鉴定为足细胞;流式细胞仪分析足细胞纯度为94.7％;间接免疫荧光和qRT-PCR均显示:与第二、三代足细胞相比,第一代足细胞中Nephrin mRNA和蛋白表达均较高(均P＜0.05);Western blot示体外培养大鼠足细胞表达两种分子量的Nephrin,且第一代足细胞Nephrin灰度值高于第二、三代足细胞(P＜0.05).结论 酶消化法结合差异过筛法接种可促进肾小球贴壁,有利于培养纯度高的足细胞;大鼠足细胞体外培养条件下能特异性表达Nephrin结构及功能蛋白.
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| 关 键 词： | 足细胞 细胞培养技术 Nephrin |
Primary culture of rat glomerular podocytes and its specific expression of Nephrin |
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| GU Jie,ZHANG Chun-jiang,JIA Lin,YANG Xiao-ping.Primary culture of rat glomerular podocytes and its specific expression of Nephrin[J].Guangdong Medical Journal,2017,38(6). |
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| Authors: | GU Jie ZHANG Chun-jiang JIA Lin YANG Xiao-ping |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | podocyte cell culture techniques Nephrin |
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