miR-149-5p靶向FGF5调节人口腔鳞状细胞癌细胞凋亡和上皮-间质转换及微管形成

目的：　探究miR-149-5p对人口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma，OSCC）细胞凋亡、上皮-间质转换（epithelial-mesenchymal transition，EMT）及微管形成的影响及作用机制。方法：　miR-149-5p mimic（mimic）和pcDNA-FGF5（FGF5）单转或共转CAL-27细胞系，RT-PCR、Western blot检测FGF5表达；双荧光素酶报告实验验证miR-149-5p和FGF5靶向关系；流式细胞术检测细胞凋亡率，Western blot检测Bax/Bcl-2蛋白表达；观察EMT细胞形态转化，Western blot检测CAL-27细胞上皮标记物E-钙黏蛋白（E-cadherin，E-cad）及间质标记物N-钙黏蛋白（N-cadherin，N-cad）表达；成管实验检测CAL-27细胞微管样形成能力，Western blot检测血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）表达。结果：　miR-149-5p mimic能明显抑制CAL-27细胞中FGF5的表达（P=0.000）；miR-149-5p mimic能明显减弱FGF5野生质粒的荧光素酶活性（P=0.000）；miR-149-5p mimic可明显上调CAL-27细胞凋亡率及Bax/Bcl-2比值（P=0.000），并逆转FGF5过表达导致的细胞凋亡率（P=0.014）及Bax/Bcl-2比值上调（P=0.000）。miR-149-5p mimic抑制EMT细胞形态由圆形到纺锤形转变，并逆向转换FGF5过表达导致的间质样细胞形态。miR-149-5p mimic可上调CAL-27细胞中E-cad的表达（P=0.000）、下调N-cad的表达（P=0.000），逆转FGF5过表达引起的E-cad表达下调（P=0.020）和N-cad表达上调（P=0.000）。miR-149-5p过表达能明显抑制CAL-27细胞微管结节形成（P=0.002），降低VEGF蛋白表达水平（P=0.000），逆转过表达FGF5引起的VEGF表达上调（P=0.000）。结论：　miR-149-5p能抑制OSCC细胞的EMT和微管形成能力并促进细胞凋亡，作用机制与靶向抑制FGF5表达有关。

miR-149-5p targeting FGF5 regulation of apoptosis, epithelial-mesenchymal transition and microtubule formation in human oral squamous cell carcinoma