| 分化型胚胎软骨发育基因1特异性小干扰RNA表达质粒的构建和鉴定 |
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| 引用本文： | 魏炎,郏雁飞,郑燕,马晓丽,江运山.分化型胚胎软骨发育基因1特异性小干扰RNA表达质粒的构建和鉴定[J].中国临床康复,2011(24):4489-4492. |
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| 作者姓名： | 魏炎 郏雁飞 郑燕 马晓丽 江运山 |
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| 作者单位： | [1]山东省医学科学院基础医学研究所,山东省济南市250062 [2]山东大学附属济南市中心医院,山东省济南市250013 |
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| 基金项目： | 济南市科技局科技计划项目（200905045-1）; 国家自然科学基金（81000869）资助项目 |
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| 摘 要： | 背景：分化型胚胎软骨基因1可调控肿瘤生长、凋亡、衰老相关因子,与肿瘤的发生发展有着重要的联系。目的：构建针对人分化型胚胎软骨基因1的小干扰RNA表达载体。方法：从NCBI中查找人分化型胚胎软骨基因1基因全长mRNA序列,利用Katahdin提供的在线小干扰RNA模板序列设计软件,设计针对分化型胚胎软骨基因1的2条shRNA的DNA模板单链,合成靶向分化型胚胎软骨基因1基因转录可形成茎环结构的寡聚核苷酸,退火后与酶切后的pGreenPuroTM shRNA Cloning and Expression Lentivector质粒连接,在JM-109菌株中扩增,并进行质粒DNA琼脂糖凝胶电泳分析、紫外分光光度计检测、菌落PCR以及测序鉴定。结果与结论：将含有分化型胚胎软骨基因1目标序列25bp的双链DNA插入片段,连接到pGreenPuroTM shRNA Cloning and Expression Lentivector质粒形成重组质粒。质粒DNA琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计分析结果确认所提质粒纯度较高,可用于后续实验。菌落PCR结果表明产物大小约为170bp,与预期相符。测序结果表明pGreenPuroTM shRNA Cloning and Expression Lentivector质粒已经插入人分化型胚胎软骨基因1的干扰合成片段,无碱基突变。成功构建了靶向分化型胚胎软骨基因1-小干扰RNA表达载体。
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| 关 键 词： | 分化型胚胎软骨基因1 小干扰RNA 构建 质粒 基因表达 |
Construction and identification of small interfering RNA expression plasmid target to differentiated embryo-chondrocyte expressed gene 1 |
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| Institution: | Wei Yan,Jia Yan-fei,Zheng Yan,Ma Xiao-li,Wang Yun-shan( 1Institute of Basic Medicine,Shandong Academy of Medical Sciences,Jinan 250062,Shandong Province,China;2Jinan Central Hospital,Shandong University,Jinan 250013,Shandong Province,China ) |
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