缺第4外显子的IL-7剪接变异体的表达、纯化与活性研究 |
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引用本文: | 陈鉴华,严思,李小波,金小宝,朱家勇,潘德顺.缺第4外显子的IL-7剪接变异体的表达、纯化与活性研究[J].免疫学杂志,2015(3):260-264. |
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作者姓名: | 陈鉴华 严思 李小波 金小宝 朱家勇 潘德顺 |
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作者单位: | 广东药学院药理系;广东省生物活性药物研究重点实验室 |
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基金项目: | 中国-意大利科技合作项目(200625) |
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摘 要: | 目的构建、表达和纯化缺乏第4外显子的IL-7剪接变异体IL-7δ4(interleukin-7 splice variant lacking exon4,IL-7δ4),并对其生物活性进行初步研究。方法将TA克隆成功的IL-7δ4基因克隆至p ET-21b载体中,构建p ET-21b-IL-7δ4的原核表达载体,阳性克隆经测序正确后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,进行IL-7δ4重组蛋白的表达、复性、纯化、Western blot法鉴定,分析其对外周血单核细胞凋亡蛋白BCL-2表达及凋亡的影响。结果成功构建重组原核表达质粒p ET-21b-IL-7δ4,表达蛋白的相对分子质量为12 400,与预期大小一致;复性效率较高(约65%),纯化后获得的蛋白纯度大于95%,Western blot证实其为rh IL-7δ4;与对照组比较,rh IL-7δ4能明显诱导外周血单核细胞凋亡蛋白BCL-2的表达,并抑制其凋亡(P<0.01)。结论成功表达高纯度且具有生物活性的rh IL-7δ4复性蛋白,它能明显上调外周血单核细胞凋亡蛋白BCL-2的表达,起抑制PBMCs凋亡作用。
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关 键 词: | rhIL-7δ4 剪接变异体 表达 纯化 活性鉴定 |
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