| 抗3-硝基酪氨酸单克隆抗体的制备及免疫学特性分析 |
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| 引用本文： | 姜海蓉,彭方毅,刘明怀,李艳景,蔡宏,左仪,杨海艳,王建霞.抗3-硝基酪氨酸单克隆抗体的制备及免疫学特性分析[J].免疫学杂志,2015(3):255-259. |
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| 作者姓名： | 姜海蓉 彭方毅 刘明怀 李艳景 蔡宏 左仪 杨海艳 王建霞 |
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| 作者单位： | 重庆理工大学药学与生物工程学院;重庆市垫江县中医院检验科;北欧生物科技(北京)有限公司 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(30571714,60873103);重庆市科委自然基金(2008BB5331,2009BB7231);重庆市卫生局科研项目(2012-2-383) |
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| 摘 要： | 目的制备抗3-硝基酪氨酸(3-NT)单克隆抗体并鉴定其免疫学特性。方法用化学合成方法将3-NT与OVA用戊二醛偶联合成的人工抗原3硝基酪氨酸-戊二醛-鸡卵白蛋白(3NT-G-OVA)作为免疫原,皮下注射免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株,扩大培养并对抗体进行免疫学鉴定与分析。结果获得1株稳定分泌抗3-硝基酪氨酸单克隆抗体的杂交瘤细胞株,所分泌的单抗亚型为Ig G2a;纯化后的抗体效价为1∶(6.14×106);单抗亲和力常数为7.81×107(L·mol-1);Western blot检测证明该单抗与含有3-硝基酪氨酸的蛋白能特异地结合。结论制备了1株具有较高免疫学活性和特异性的抗3-NT单克隆抗体,并可用于Western blot检测病人样本中的蛋白硝基化水平。
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| 关 键 词： | 3-硝基酪氨酸 单克隆抗体 间接ELISA Western blot |
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