| 携EGFP的人低氧诱导因子-1α腺病毒载体的构建及鉴定 |
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| 引用本文： | 谢宜军,王月刚,郭寿贵,童锴,吴平生.携EGFP的人低氧诱导因子-1α腺病毒载体的构建及鉴定[J].第三军医大学学报,2007,29(2):117-120. |
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| 作者姓名： | 谢宜军 王月刚 郭寿贵 童锴 吴平生 |
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| 作者单位： | 南方医科大学南方医院心内科,广州,510515;南方医科大学南方医院心内科,广州,510515;南方医科大学南方医院心内科,广州,510515;南方医科大学南方医院心内科,广州,510515;南方医科大学南方医院心内科,广州,510515 |
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| 摘 要： | 目的 构建携EGFP的人低氧诱导因子(hypoxia-induciblefactor 1 alpha,HIF-1α)腺病毒表达载体,为研究人HIF-1α基因对冠心病的血管新生作用奠定基础.方法 采用分子克隆技术,以Kpn Ⅰ、Apa Ⅰ双酶切pcDNA3.1( )-HIF1α质粒获得HIF-1α cDNA,克隆到质粒pEGFP-C1,以Nhe Ⅰ、Apa Ⅰ双酶切得到EGFP-HIF-1α cDNA,重组到穿梭质粒pShuttle2,再以PI-Sce Ⅰ和I-Ceu Ⅰ双酶切重组穿梭质粒,获得含有EGFP-HIF-1α cDNA的表达盒,与线性化的腺病毒骨架质粒Adeno-X Viral DNA连接,重组成pAdeno-EGFP-HIF-1α腺病毒质粒,脂质体法转染HEK293细胞,荧光显微镜下观察结果,在HEK293细胞中包装成为重组Adeno-EGFP-HIF-1α腺病毒,并进行PCR鉴定及滴度测定.结果 经酶切鉴定及PCR证实重组腺病毒质粒构建成功,包装后冻融细胞的上清PCR检测重组腺病毒包装成功,病毒滴度为2×109nfu/ml.结论 成功构建重组腺病毒Adeno-EGFP-HIF-1α,为冠心病的HIF-1α基因治疗研究奠定更直观的基础.
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| 关 键 词： | 低氧诱导因子-1α 绿色荧光蛋白 基因治疗 |
| 文章编号： | 1000-5404（2007）02-0117-04 |
| 修稿时间： | 2006-02-22 |
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