| 应用Tet-On基因表达系统实现Mac-1-FP在CHO细胞中的可调控性表达 |
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| 引用本文： | 杨生生,杨志峰,严鸣,蔡在龙,焦炳华,毛积芳. 应用Tet-On基因表达系统实现Mac-1-FP在CHO细胞中的可调控性表达[J]. 第二军医大学学报, 2006, 27(10): 1092-1097 |
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| 作者姓名： | 杨生生 杨志峰 严鸣 蔡在龙 焦炳华 毛积芳 |
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| 作者单位： | 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室,上海,200433;基础医学部病理生理学教研室,上海,200433 |
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| 摘 要： | 目的:应用Tet-On基因表达系统构建可调控性真核表达质粒,实现Mac-1-FP在CHO细胞中的可调控性表达.方法:采用DNA重组技术构建真核表达质粒pTRE-Tight-CFP-CD11b和pTRE-Tight-YFP-CD18(CD11b和CD18是Mac-1的两个亚基),通过脂质体介导共转染CHO细胞,用荧光显微镜观察转染后阳性细胞;应用RT-PCR和荧光强度分析观察不同浓度(0、0.01、0.1、0.5、1、2 μg/ml)强力霉素(Dox)对细胞内CD11b和CD18表达水平的影响;检测PMA(1 μg/ml)刺激前后CHO-Mac-1-FP细胞与其配基ICAM-1黏附活性的变化.结果:酶切鉴定和测序证实,已成功构建真核表达质粒pTRE-Tight-CFP-CD11b和pTRE-Tight-YFP-CD18,在荧光显微镜下观察到转染成功的CHO细胞发出青色荧光和黄色荧光.通过荧光显微镜观察到随着培养液中Dox浓度的增加,CHO细胞内的荧光强度相应增强,同时CD11b和CD18在mRNA水平的表达也随Dox浓度的增加而增加.PMA刺激后,CHO-Mac-1-FP细胞与其配基ICAM-1黏附率增高(2 h和4 h时最高,此后逐渐下降).结论:本研究成功实现了Mac-1-FP在CHO细胞中的可调控性表达并具有野生型Mac-1的黏附活性,为进一步开展单分子光谱(SMS)和荧光共振能量转移(FRET)技术研究活细胞内Mac-1分子的2个亚基的二聚化、群集、构象及与配基亲和力变化创造条件.
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| 关 键 词： | Mac-1 青色荧光蛋白 黄色荧光蛋白 融合蛋白 可调控表达 |
| 文章编号： | 0258-879X（2006）10-1092-06 |
| 收稿时间： | 2006-01-14 |
| 修稿时间： | 2006-09-13 |
Inducible expression of Mac-1-FP in Chinese hamster ovary cells using Tet-On gene expression system |
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| YANG Sheng-sheng,YANG Zhi-feng,YAN Ming,CAI Zai-long,JIAO Bing-hu,MAO Ji-fang. Inducible expression of Mac-1-FP in Chinese hamster ovary cells using Tet-On gene expression system[J]. Former Academic Journal of Second Military Medical University, 2006, 27(10): 1092-1097 |
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| Authors: | YANG Sheng-sheng YANG Zhi-feng YAN Ming CAI Zai-long JIAO Bing-hu MAO Ji-fang |
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| Keywords: | Mac-1 |
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