上调PTEN基因表达对白血病耐药细胞系K562/ADM细胞化疗增敏作用的实验研究

目的 探讨上凋PTEN表达对白血病耐药细胞化疗增敏的作用及其机制.方法 将PTEN真核表达质粒导入耐阿霉素(ADM)的K562细胞(K562/ADM细胞)中,采用Western blot和RTPCR方法检测PTEN基因在转染前后细胞的表达,MTT法检测ADM对转染前后K562/ADM细胞存活率的影响,应用流式细胞术检测细胞凋亡百分率,采用重组人半胱天冬酶-3(caspase-3)活性定量试剂盒分析caspase-3的活性,Western blot检测自噬微管相关蛋白轻链3(LC3)-I/Ⅱ、自噬相关蛋白Beelinl、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和磷酸化40S核糖体蛋白6s激酶(p-p70S6K)的表达,单丹磺酰戊二胺(MDC)染色和透视电镜观察自噬泡的情况.结果 ①与未经处理和转染空载体的K562/ADM细胞相比,转染PTEN基因的K562/ADM细胞组PTEN mRNA和蛋白表达水平均增高;②转染PTEN基因使K562/ADM细胞对ADM的敏感性增强,与转染空载体细胞比较,其细胞存活率从(94.07±2.60)%降低到(53.83±4.20)%,细胞凋亡率从(11.89±1.70)%增加到(43.69±2.30)%;经caspase-3抑制剂(Z-DEVE-FMK)预处理后,未能完全阻止ADM对细胞的毒性作用;③ADM处理细胞12和24 h后,转染PTEN基因的K562/ADM细胞casepase-3活性(2.27±0.13和3.15±0.08)均明显高于转染空载体组(1.19±0.14和1.48±0.06)(P值均<0.05);④与转染空载体组比较,转染PTEN基因的K562/ADM细胞LC3-Ⅱ和Beclinl的蛋白表达水平分别增加83%和18%,p-Akt和p-p70S6K的蛋白表达水平分别降低96%和87%;⑤增加PTEN的表达,细胞内自噬泡较转染空载体组明显增多.结论 上调PTEN基因表达能明显增加K562/ADM细胞对ADM的敏感性,该作用可能与上调PTEN基因表达、抑制P13K/AkL/mTOR通路活性从而促进细胞凋亡和自噬的发生有关.

Experimental study of up-regulating PTEN gene on increasing the chemosensitivity in K562/ADM cells