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| 王棕花粉过敏原基因的克隆表达、纯化及免疫学鉴定 | |
| 引用本文： | 姚敏,孟光,刘志刚,邬玉兰,张红云.王棕花粉过敏原基因的克隆表达、纯化及免疫学鉴定[J].中华微生物学和免疫学杂志,2007,27(11):1054-1058. |
| 作者姓名： | 姚敏 孟光 刘志刚 邬玉兰 张红云 |
| 作者单位： | 1. 海口市人民医院,570208 2. 海口市人民医院耳鼻喉科,570208 3. 深圳大学过敏反应与免疫学研究所,510860 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金，海南省自然科学基金指导性计划，广东省科技重点专项 |
| 摘 要： | 目的 克隆并表达王棕花粉中泛变应原肌动蛋白抑制蛋白(profilin).方法 利用RT-PCR结合RACE技术克隆王棕花粉中泛变应原profilin的全长基因,并进行序列分析.然后设计带有酶切位点的特异性引物,采用RT-PCR获得整个王棕花粉profilin的开放阅读框,将其与pET28a载体连接并转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,通过Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,采用Western blot检测其IgE结合活性.结果 克隆获得了王棕花粉profilin的全长基因,由675个碱基组成,开放阅读框为396个碱基(包括终止密码子),编码131个氨基酸.经分析,这个序列编码的蛋白为小分子质量酸性蛋白,等电点为4.86,相对分子质量(Mr)约为14.2×103.此序列已被GenBank收录,登录号为EF173599.重组王棕花粉profilin在大肠杆菌中高效表达,进一步经Ni2+亲和层析柱纯化后经Western blot检测具有良好的免疫学活性.结论 成功克隆和表达了王棕花粉profilin,为王棕过敏的诊断和免疫治疗奠定了基础. |
| 关 键 词： | 王棕花粉 肌动蛋白抑制蛋白 基因表达 纯化 |
Cloning, expression and immunocharacterization of panallergen profilin from Cocos nucifera pollen |
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| YAO Min,MENG Guang,LIU Zhi-gang,WU Yu-lan,ZHANG Hong-yun.Cloning, expression and immunocharacterization of panallergen profilin from Cocos nucifera pollen[J].Chinese Journal of Microbiology and Immunology,2007,27(11):1054-1058. | |
| Authors: | YAO Min MENG Guang LIU Zhi-gang WU Yu-lan ZHANG Hong-yun |
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