| 人可溶性B淋巴细胞刺激因子基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 |
| |
| 引用本文： | 孙剑,黎燕,冯建男,孙瑛勋,胡美茹,沈倍奋. 人可溶性B淋巴细胞刺激因子基因的克隆及在大肠杆菌中的表达[J]. 细胞与分子免疫学杂志, 2006, 22(2): 171-173 |
| |
| 作者姓名： | 孙剑 黎燕 冯建男 孙瑛勋 胡美茹 沈倍奋 |
| |
| 作者单位： | 1. 天津大学药物科学与技术学院分子细胞药理系,天津,300072;军事医学科学院基础医学研究所,北京,100850
2. 军事医学科学院基础医学研究所,北京,100850 |
| |
| 摘 要： | 目的:钓取人B细胞刺激因子基因,构建其表达的大肠杆菌工程菌,并体外表达、纯化可溶性B细胞刺激因子方法:从人外周血单个核细胞(PBMC)中提取总RNA并逆转录得到cDNA,用PCR扩增目的基因,连接到原核生物表达载体pET-30a上。制备质粒后,酶切、进行菌落PCR及DN测序对其进行鉴定。然后转化大肠杆菌BL21(DE3)并表达对纯化的目的蛋白进行肽质量指纹分析、鉴定,并进一步做体外B细胞刺激试验。结果:RT-PCR钓取出可溶性B细胞刺激因子基因片段。DNA测序结果与报道序列完全一致。在IPTG诱导下,目的基因在工程菌中表达。利用镍金属螯合琼脂糖凝胶亲和层析柱分离。纯化目的蛋白的肽质量指纹图经Mascot搜索与B细胞刺激因子吻合。纯化的蛋白在体外可刺激B细胞增殖。结论:成功地克隆可溶性B细胞刺激因子基因,表达的纯化目的蛋白是具有生物学活性的B细胞刺激因子。
|
| 关 键 词： | B细胞刺激因子 表达 B细胞 |
| 文章编号： | 1007-8738（2006）02-0171-03 |
| 收稿时间： | 2005-03-23 |
| 修稿时间： | 2005-06-11 |
Cloning and expression of soluble B lymphocyte stimulator |
| |
| SUN Jian,LI Yan,FENG Jian-nan,SUN Ying-xun,HU Mei-ru,SHEN Bei-feng. Cloning and expression of soluble B lymphocyte stimulator[J]. Chinese journal of cellular and molecular immunology, 2006, 22(2): 171-173 |
| |
| Authors: | SUN Jian LI Yan FENG Jian-nan SUN Ying-xun HU Mei-ru SHEN Bei-feng |
| |
| Affiliation: | 1. Department of Molecular and Cellular Pharmacology, Tianjin University, Tianjin 300072; 2.The Basic Institute, the Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100850, China |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | B lymphocyte stimulator expression B cell |
| 本文献已被 CNKI 维普 万方数据 等数据库收录！ |
|
