| SARS冠状病毒RNA依赖的RNA聚合酶的原核和真核表达 |
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| 引用本文： | 张蕾,张海婧,段素素,赵艳,车昌燕,张云,王树蕙,刘力.SARS冠状病毒RNA依赖的RNA聚合酶的原核和真核表达[J].中国卫生检验杂志,2008,18(10). |
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| 作者姓名： | 张蕾 张海婧 段素素 赵艳 车昌燕 张云 王树蕙 刘力 |
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| 作者单位： | 中国医学科学院基础医学研究所病原微生物学系,北京,100005 |
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| 摘 要： | 目的:在大肠杆菌中表达和纯化重组RDRP蛋白,观察RDRP蛋白在293细胞中的表达及亚细胞定位.方法:构建原核表达质粒pGEX-4T-1-RDRP,实现插入基因的融合表达,经GST亲合层析纯化蛋白.构建真核表达载体pCMV-myc-RDRP瞬时转染293细胞,转染48 h后免疫荧光染色,共聚焦显微镜观察蛋白表达及定位以及Western Blotting检测.结果:成功构建了表达RDRP融合蛋白的原核表达载体,并在大肠杆菌内高效表达,纯化后得到分子量约为121 kDa的融合蛋白.RDRP蛋白在293细胞中高效表达,主要分布在细胞质.结论:获得了重组GST-RDRP融合蛋白,为进一步探讨RDRP的功能奠定基础,在真核细胞中过表达的RDRP蛋白主要定位在细胞质.
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| 关 键 词： | RNA依赖的RNA聚合酶 原核表达 真核表达 蛋白纯化 |
Prokaryotic and eukaryotic expression of RNA dependent RNA polymerase of SARS |
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| Zhang Lei,Zhang Hai-jing,Duan Su-su,Zhao Yan,Che Chang-yan,Zhang Yun,Wang Shu-hui,Liu Li.Prokaryotic and eukaryotic expression of RNA dependent RNA polymerase of SARS[J].Chinses Journal of Health Laboratory Technology,2008,18(10). |
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| Authors: | Zhang Lei Zhang Hai-jing Duan Su-su Zhao Yan Che Chang-yan Zhang Yun Wang Shu-hui Liu Li |
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