TGF -β1/Smad3对辐射所致鼻咽癌细胞凋亡及细胞周期分布的影响 |
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作者姓名: | 李铭仪 冯晓敏 陈冬平 刘锦全 李洲宇 尹文晶 蒋绍惠 周祥 |
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作者单位: | 广州医科大学附属肿瘤医院放疗五科 广州510095 |
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基金项目: | 广东省科技计划项目(编号2014A020212345),广东省医学科研基金指令性课题(编号C2015038),广州医科大学青年科研项目(编号2014A34) |
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摘 要: | 目的:探讨TGF-β1/Smad3在辐射所致鼻咽癌细胞CNE-2凋亡中的作用及其机制。方法 CNE-2细胞分为6 Gy照射组、TGF-β1+6 Gy照射组以及对照组,免疫荧光方法检测γH2AX焦点形成试验,流式细胞仪检测凋亡细胞及细胞周期分布,MTS法检测细胞生长生长活力,绘制生长曲线并计算生长增殖率。 Western blot 检测P-ATM、pCHK1、pCHK2、CDC25A、p-Smad3、Smad3、P15和CDK4蛋白表达水平。结果照射组及TGF-β1+6 Gy照射组凋亡细胞数明显增多,细胞核体积缩小,可见浓染致密的γH2AX表达。 TGF-β1+6 Gy 照射组的γH2AX表达相对于对照组与6 Gy照射组明显增加。6 Gy照射组和TGF-β1+6 Gy照射组的G2/M期细胞比例均明显高于对照组(P<0.05)。 TGF-β1+6 Gy照射组与6 Gy照射组相比,S期明显增加(P<0.05)。 TGF-β1+6 Gy照射组和6 Gy照射组的凋亡及坏死细胞比对照组的明显增加,差异有统计学意义( P<0.01)。 TGF-β1+6 Gy照射组的凋亡和坏死细胞比例明显比6 Gy照射组增加,差异有统计学意义( t P<0.05)。对照组、6 Gy照射组和TGF-β1+6 Gy组的CNE-2细胞克隆形成率分别为0.60、0.03和0.01,与对照组相比,6 Gy照射组和TGF-β1+6 Gy照射组的细胞克隆形成明显减少,差异有统计学意义( P<0.01)。与6 Gy照射组相比,TGF-β1+6 Gy照射组的细胞形成率减少,差异有统计学意义( P<0.01)。 Western blot 结果显示TGF-β1处理组相对于单独6 Gy照射组,p-ATM、p-CHK1、p-CHK2、P15、p-Smad3、CDC25A及CDK4表达下调,Smad3表达无明显变化。结论 TGF-β1可增加照射所致鼻咽癌细胞的凋亡,可能与增加S期细胞比例以及抑制Smad3磷酸化同时促进ATM磷酸化有关。
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关 键 词: | 鼻咽癌 辐射 放射敏感性 Smad3蛋白 磷酸化 |
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