TGF －β1／Smad3对辐射所致鼻咽癌细胞凋亡及细胞周期分布的影响

目的：探讨TGF－β1／Smad3在辐射所致鼻咽癌细胞CNE－2凋亡中的作用及其机制。方法 CNE－2细胞分为6 Gy照射组、TGF－β1＋6 Gy照射组以及对照组，免疫荧光方法检测γH2AX焦点形成试验，流式细胞仪检测凋亡细胞及细胞周期分布，MTS法检测细胞生长生长活力，绘制生长曲线并计算生长增殖率。 Western blot 检测P－ATM、pCHK1、pCHK2、CDC25A、p－Smad3、Smad3、P15和CDK4蛋白表达水平。结果照射组及TGF－β1＋6 Gy照射组凋亡细胞数明显增多，细胞核体积缩小，可见浓染致密的γH2AX表达。 TGF－β1＋6 Gy 照射组的γH2AX表达相对于对照组与6 Gy照射组明显增加。6 Gy照射组和TGF－β1＋6 Gy照射组的G2／M期细胞比例均明显高于对照组（P＜0.05）。 TGF－β1＋6 Gy照射组与6 Gy照射组相比，S期明显增加（P＜0.05）。 TGF－β1＋6 Gy照射组和6 Gy照射组的凋亡及坏死细胞比对照组的明显增加，差异有统计学意义（ P＜0.01）。 TGF－β1＋6 Gy照射组的凋亡和坏死细胞比例明显比6 Gy照射组增加，差异有统计学意义（ t P＜0.05）。对照组、6 Gy照射组和TGF－β1＋6 Gy组的CNE－2细胞克隆形成率分别为0.60、0.03和0.01，与对照组相比，6 Gy照射组和TGF－β1＋6 Gy照射组的细胞克隆形成明显减少，差异有统计学意义（ P＜0.01）。与6 Gy照射组相比，TGF－β1＋6 Gy照射组的细胞形成率减少，差异有统计学意义（ P＜0.01）。 Western blot 结果显示TGF－β1处理组相对于单独6 Gy照射组，p－ATM、p－CHK1、p－CHK2、P15、p－Smad3、CDC25A及CDK4表达下调，Smad3表达无明显变化。结论 TGF－β1可增加照射所致鼻咽癌细胞的凋亡，可能与增加S期细胞比例以及抑制Smad3磷酸化同时促进ATM磷酸化有关。