pCMV -Myc -MyD88重组质粒构建及其在293 T细胞中的表达 |
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作者姓名: | 潘洁 邓延梅 何雅军 刘志河 吕霞 沈雁 宋慧东 舒建昌 |
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作者单位: | 1. 广东省广州市第十二人民医院消化内科 510620;2. 暨南大学医学院附属广州市红十字会医院消化内科 510220 |
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基金项目: | 中国肝炎防治基金-王宝恩肝纤维化基金资助课题(编号CF-HPC20131014) |
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摘 要: | 目的:构建髓样分化因子88(MyD88)真核表达质粒,并检测其在293T细胞中的表达,为进一步研究应用奠定实验基础。方法从大鼠肝星状细胞株T-6中提取总RNA,应用PCR技术扩增MyD88基因编码序列片段,克隆入真核表达载体pCMV-Myc质粒中,对重组质粒经酶切和测序鉴定后,以钙离子转染法转染至293T细胞中,采用Western blot的方法检测MyD88蛋白的表达,以观察转染及表达效果。结果酶切及测序结果证明pCMV-Myc-MyD88重组质粒的DNA序列正确,将其转染至293T细胞后,MyD88蛋白表达明显增加。结论pCMV-Myc-MyD88重组质粒构建成功,并能在293T细胞中表达,为进一步研究针对MyD88分子的疾病治疗及其生物学功能奠定了实验基础。
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关 键 词: | MyD88 重组质粒 293T细胞 |
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