利用亲和捕获法筛选杂交体(SHAC):一种获得染色体特定区带富集的cDNA片段的方法

作者介绍了一种分离染色体特定区带cDNA片段的方法——利用亲和捕获法筛选杂交体(SHAC)。 在倒置显微镜下切割持定的染色体或染色体区带,然后用DOP-PCR进行两轮扩增,PCR产物用生物素标记后进行原位杂交检则其特异性;以特定组织的mRNA为模板构建cDNA文库,在cDNA的两端都加上一个连接体接头。生物素标记的PCR产物用Cot-1基因组DNA封闭重复顺序后与变性的cDNA文库在液相中杂交,杂交后用带有链霉亲和素的磁珠捕获带生物素的杂交体,然后用碱变性法释放所捕获的cDNA并进行PCR扩增。为了检测所