| 采用GatewayTM系统构建人Rb94基因重组腺病毒载体 |
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| 引用本文： | 李进,王芹,宋力,刘强,王月英,唐卫生,张宁,王蕾.采用GatewayTM系统构建人Rb94基因重组腺病毒载体[J].肿瘤防治研究,2010,37(9):975-978. |
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| 作者姓名： | 李进 王芹 宋力 刘强 王月英 唐卫生 张宁 王蕾 |
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| 作者单位： | 中国医学科学院放射医学研究所,天津市分子核医学重点实验室,天津,300192 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目,中国医学科学院放射医学研究所基金资助项目 |
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| 摘 要： | 目的 采用GatewayTM技术构建人Rb94基因重组腺病毒载体(Ad-hRb94)。方法 从人类胚胎中提取总RNA,经反转录得到目的cDNA,PCR扩增Rb94目的基因片段。设计含有attB侧翼序列的引物,用于重组片段的PCR扩增,在BP重组酶的作用下,将含attB位点的PCR产物与受体载体pDONRTM221发生重组反应,产生入门克隆。在LR重组酶作用下,将入门克隆与带attR1、attR2位点的目的载体 Ad／CMV／V5-DEST体外重组形成表达克隆 Ad-hRb94。经PCR和测序鉴定,将 Ad-hRb94线性化后转入 293A细胞进行病毒的包装、扩增及病毒滴度测定。结果 经PCR和测序证实目的基因Rb94片段按正确方向重组入目的载体中,带Rb94基因的目的载体在 293A细胞中包装成功,获得高滴度的病毒颗粒,滴度为9.41×1010pfu／ml。结论本实验利用GatewayTM技术成功构建了Ad-hRb94,为进一步进行肿瘤基因治疗研究奠定了实验基础。
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| 关 键 词： | 人视网膜母细胞瘤94基因 GatewayTM技术 重组腺病毒 |
| 收稿时间： | 2009-5-20 |
| 修稿时间： | 2009-11-12 |
Construction of Recombinant Adenovirus Vector for hRb94 Gene Using GatewayTM Clone Technology |
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| LI Jin,WANG Qin,SONG Li,LIU Qiang,WANG Yue-ying,TANG Wei-sheng,ZHANG Ning,WANG Lei.Construction of Recombinant Adenovirus Vector for hRb94 Gene Using GatewayTM Clone Technology[J].Cancer Research on Prevention and Treatment,2010,37(9):975-978. |
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| Authors: | LI Jin WANG Qin SONG Li LIU Qiang WANG Yue-ying TANG Wei-sheng ZHANG Ning WANG Lei |
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| Institution: | Tianjin Key Laboratory of Molecular Nuclear Medicine, Institute of Radiation Medicine,Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College,Tianjin 300192, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Human retinoblastoma 94 gene" target="_blank">Human retinoblastoma 94 gene')" href="#">Human retinoblastoma 94 gene GatewayTM clone technology Recombinant adenovirus vector" target="_blank">')" href="#">Recombinant adenovirus vector |
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