p53C—末端356—393氨基酸对人肺癌细胞恶性表型的影响 |
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作者姓名: | 汪蕙 李金照 等 |
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作者单位: | [1]北京市结核病胸部肿瘤研究所 [2]中国科学院生物物理研究所 |
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摘 要: | 目的:根据p53蛋白中心区与特殊DNA序列结合活性,受到C-末端氨基酸负面影响,研究去掉C-末端氨基酸残基外源p53,是否增加对人肺癌细胞恶性生长的抑制。方法;利用DNA重组技术,构建去掉C-末端356-393区37个氨基酸p53和全工p53的真核细胞表达质粒,(PEGFP-p53(del),PEGFP-p53)。经lipofectin介导转染有p53缺失和突变的人肺癌细胞801D,G418筛选,建立单克隆转染细胞系,PCR检测外源基因,镜检细胞绿色荧光(GFP)蛋白表达,细胞集落形成试验检测细胞体外恶性增殖能力。FAX检测细胞周期,行裸鼠移植瘤试验检测细胞体内恶性增殖能力。结果:获转染细胞克隆系PEGFP-p53(del)-801D、PEGFP-p53-801D。PEGFP-801D.PCR证明外源基因在细胞中存在,镜检证明绿荧光蛋白在细胞中表达。体外集落形成实验证明PEGFP-p53(del)-801D集落形成抑制率为99.6%,PEGFP-p53-801D为81%。PEGFP-p53(del)-801D细胞恶性增殖能力明显低于PEGFP-p53-801D。P<0.01。裸鼠移植瘤实验证明PEGFP-p53(del)-801D和PEGFP-p53-801D恶性增殖增殖能力明显降低。PEGFP-p53(del)-801D移植瘤细胞中可检测出绿荧光蛋白表达,证明外源p53(del)基因在肿瘤中存在和表达,也显示出PEGFP-p53(del)-801D和PEGFP-p53-801D仍有活的癌细胞存在。结论:去掉C-末端356-393氨基酸残基外源p53明显增加对801D细胞体外恶性增殖抑制。801D细胞对外源p53抑癌作用存在“异质性”。
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关 键 词: | 肺癌 去C-末端氨基酸p53 转染细胞 集落形成 细胞生长 |
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