BJAB细胞在转导6A8 α-甘露糖苷酶的反义DNA后发生oncosis样死亡

目的：采用形态学和分子生物学方法，分析转导6A8α-甘露糖苷酶的反义DNA导致的B细胞株BJAB死亡的性质。方法：用Giemsa染色、annexin-V荧光染色、梯形DNA电泳以及透射电子显微镜等方法，分析细胞死亡的性质；应用ConA结合试验，检测转基因细胞6A8α－甘露糖苷酶活性的改变；应用Fluo-3探针测定细胞胞浆[Ca^2 ]i。结果：用重组腺相关病毒（rAAV)颗粒成功地将反义6A8DNA转导入了EB病毒转化的B细胞株BJAB。在克隆中，转导反义6A8 DNA的BJAB细胞在生长到3－10个细胞时死亡，而野生型、转导空载或转导正义6A8 DNA的BJAB细胞生长良好。转导反义6A8 DNA的BJAB细胞呈聚集状生长，且有大量细胞肿胀，最终死亡。Giemsa染色光镜观察、annexin-V荧光染色、梯形DNA电泳及透射电镜观察结果表明，这种死亡是一种oncosis(肿胀死）样死亡。ConA结合试验表明，BJAB细胞在转导反义6A8 DNA后的结合率升高，而转导正义6A8 DNA后的结合率则下降。另外，转导反义6A8 DNA的细胞胞浆[Ca^2 ]i升高。结论：转导反义6A8 DNA引起BJAB细胞发生oncosis样死亡，这种死亡可能与6A8α-甘露糖苷酶表达被抑制有关。