| E2F3基因腺相关病毒干扰载体的构建 |
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| 引用本文： | 胡海龙,韩瑞发,孙岩,刘利维,任海林,梁恩利,王春阳,吴长利. E2F3基因腺相关病毒干扰载体的构建[J]. 中国肿瘤临床, 2009, 36(19). DOI: 10.3969/j.issn.1000-8179.2009.19.011 |
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| 作者姓名： | 胡海龙 韩瑞发 孙岩 刘利维 任海林 梁恩利 王春阳 吴长利 |
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| 作者单位： | 天津市泌尿外科研究所,天津市,300211 |
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| 基金项目： | 本文课题受国家自然科学基金，天津市科技计划项目，天津市高等学校科技发展基金计划项目，天津市卫生局科技基金资助 |
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| 摘 要： | 目的:构建针对E2F3基因的腺相关病毒干扰穿梭质粒载体,为进一步包装能够表达干扰序列的病毒奠定基础.方法:通过已经合成的pRNAT-U6.1-siE2F3/Neo干扰质粒载体,进行限制性内切酶Mlu酶切,将干扰片段克隆入线性质粒pAAV-MCS中,构建具有表达沉默E2F3基因的RNA干扰穿梭质粒.通过BglⅡ及Mlu单酶切,BamH1和HandⅢ双酶切、PCR鉴定及基因片段序列分析验证构建是否成功.结果:pAAV-siE2F3线性化后,片段大小约6 300bp;以Mlu为两边酶切位点设计的引物对重组质粒进行PCR,可获得的产物大小1700bp;应用ITR专用引物进行重组质粒的PCR后证实本研究所构建的重组质粒ITR片段存在,大小约3500bp,上述指标均与预期设计结果相符.基因测序结果表明插入序列无基因突变,序列完整.结论:穿梭质粒载体的成功构建,为进一步包装能够表达针对E2F3基因干扰序列的腺相关病毒,进一步研究E2F3基因在肿瘤中的功能奠定基础.
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| 关 键 词： | AAV系统 |
Construction of Adeno-associated Virus RNA Interference System to Target E2F3 Gene |
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| Keywords: | RNAi E2F3 |
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